| 摘要 | 第1-9页 |
| Abstract | 第9-11页 |
| 第一章 文献综述 | 第11-24页 |
| 引言 | 第11页 |
| 1 芋螺毒素研究概况 | 第11-16页 |
| ·芋螺毒素的分布及危害 | 第11-12页 |
| ·芋螺毒素的结构及分类 | 第12-13页 |
| ·芋螺毒素的作用机理 | 第13-16页 |
| ·作用于电压门控离子通道的芋螺毒素 | 第13-15页 |
| ·作用于配体门控离子通道的芋螺毒素 | 第15-16页 |
| ·作用于其他受体的芋螺毒素 | 第16页 |
| 2 芋螺毒素的检测 | 第16-17页 |
| ·高效液相色谱法 | 第16页 |
| ·电喷雾-四极杆-飞行时间质谱 | 第16-17页 |
| ·铜螯合纳米磁珠结合生物质谱 | 第17页 |
| ·免疫学检测方法 | 第17页 |
| 3 噬菌体展示技术 | 第17-24页 |
| ·噬菌体展示技术概述 | 第17-18页 |
| ·噬菌体展示技术在抗体方向的应用 | 第18-22页 |
| ·抗体的结构 | 第18-20页 |
| ·基因工程抗体 | 第20-22页 |
| ·噬菌体抗体库 | 第22-24页 |
| 第二章 ω-CTX MVIIA 的高效表达 | 第24-39页 |
| 引言 | 第24-25页 |
| 材料与方法 | 第25-32页 |
| 1 材料 | 第25-26页 |
| ·菌株与质粒 | 第25页 |
| ·培养基 | 第25页 |
| ·试剂与材料 | 第25-26页 |
| 2 实验方法 | 第26-32页 |
| ·大肠杆菌质粒的提取 | 第26页 |
| ·ω-CTX MVIIA 蛋白质序列及基因序列的获得 | 第26-27页 |
| ·ω-CTX MVIIA 基因寡核苷酸链的处理 | 第27页 |
| ·重组质粒pGEX-6p-1-ctx 的构建 | 第27页 |
| ·重组质粒pET32a(+)-ctx 的构建 | 第27-28页 |
| ·大肠杆菌的转化 | 第28页 |
| ·感受态细胞的制备 | 第28页 |
| ·大肠杆菌的转化 | 第28页 |
| ·重组质粒的筛选、检测 | 第28页 |
| ·GST-CTX 蛋白质的诱导表达 | 第28-29页 |
| ·GST-CTX 融合蛋白的纯化 | 第29页 |
| ·TRX-CTX 蛋白的诱导表达及纯化 | 第29-30页 |
| ·透析及浓缩 | 第30页 |
| ·SDS-PAGE 分析蛋白纯度及分子量 | 第30页 |
| ·蛋白质的浓度测定 | 第30-32页 |
| 结果与分析 | 第32-36页 |
| 1 重组质粒pGEX-6p-1-ctx 及pET32a(+)-ctx 的构建 | 第32-33页 |
| 2 融合蛋白在大肠杆菌中的表达与纯化 | 第33-34页 |
| 3 蛋白浓度的测定 | 第34-36页 |
| 讨论 | 第36-38页 |
| 1 ω-CTX MVIIA 蛋白质序列及基因序列的获得 | 第36页 |
| 2 ω-CTX MVIIA 的原核表达载体的构建 | 第36页 |
| 3 融合蛋白质在大肠杆菌中的可溶性表达与纯化 | 第36-37页 |
| 4 蛋白质浓度的测定 | 第37-38页 |
| 结论 | 第38-39页 |
| 第三章 单链抗体的淘选 | 第39-61页 |
| 引言 | 第39-40页 |
| 材料与方法 | 第40-49页 |
| 1 材料 | 第40-41页 |
| ·细胞及细胞株 | 第40页 |
| ·质粒载体 | 第40页 |
| ·PCR 引物 | 第40-41页 |
| ·试剂与材料 | 第41页 |
| ·培养基 | 第41页 |
| 2 实验方法 | 第41-49页 |
| ·动物免疫 | 第41-42页 |
| ·测血清效价 | 第42页 |
| ·总RNA 的提取 | 第42-43页 |
| ·第一链cDNA 反转录合成 | 第43页 |
| ·轻、重链基因的扩增 | 第43-44页 |
| ·scFv DNA 的组装与扩增 | 第44页 |
| ·scFv DNA 片段的SfiⅠ和NotⅠ酶切 | 第44-45页 |
| ·pCANTAB 5E-scFv 重组质粒的构建 | 第45-46页 |
| ·重组噬菌体的制备 | 第46页 |
| ·库容量的滴定 | 第46-47页 |
| ·用ELISA 方法检测CTX 蛋白质特异性的单链抗体 | 第47页 |
| ·scFv 序列分析 | 第47页 |
| ·scFv 单链抗体可溶性表达与ELISA 检测 | 第47-49页 |
| 结果与分析 | 第49-58页 |
| 1 效价的测定 | 第49-50页 |
| 2 脾脏总RNA 提取及cDNA 合成 | 第50-51页 |
| 3 V_H 和V_L 的扩增 | 第51-52页 |
| 4 scFv 基因的组装与扩增 | 第52-53页 |
| 5 噬菌体重组质粒载体的构建 | 第53页 |
| 6 噬菌体抗体库的构建 | 第53页 |
| 7 噬菌体抗体库富集淘选scFv | 第53-54页 |
| 8 单链抗体特异性鉴定 | 第54-55页 |
| 9 单链抗体的PCR 和酶切验证 | 第55-56页 |
| 10 scFv 的可溶性表达与ELISA 检测 | 第56-58页 |
| 讨论 | 第58-60页 |
| 1 小鼠免疫与血清效价测定 | 第58页 |
| 2 总RNA 提取 | 第58-59页 |
| 3 单链抗体的制备过程 | 第59-60页 |
| 4 抗体基因的酶切 | 第60页 |
| 结论 | 第60-61页 |
| 参考文献 | 第61-65页 |
| 致谢 | 第65-66页 |
| 附录 | 第66-76页 |
