| 摘要 | 第3-4页 |
| Abstract | 第4页 |
| 缩略语表 | 第9-10页 |
| 引言 | 第10-16页 |
| 1 环形泰勒虫研究进展 | 第10-13页 |
| 1.1 环形泰勒虫病原形态 | 第10-11页 |
| 1.2 环形泰勒虫生活史 | 第11页 |
| 1.3 环形泰勒虫病流行病学特征 | 第11-12页 |
| 1.4 环形泰勒虫病临床症状 | 第12页 |
| 1.5 环形泰勒虫病病理变化 | 第12-13页 |
| 2 环形泰勒虫病常用诊断方法 | 第13-15页 |
| 2.1 病原体显微镜检测方法 | 第13页 |
| 2.2 间接荧光抗体试验(IFAT) | 第13页 |
| 2.3 酶联免疫吸附试验(ELISA) | 第13-14页 |
| 2.4 PCR检测法 | 第14页 |
| 2.5 反向线形印迹杂交(RLB)法 | 第14-15页 |
| 3 预防与治疗 | 第15页 |
| 4 研究目的和意义 | 第15-16页 |
| 实验研究 | 第16-40页 |
| 实验一 环形泰勒虫spm-N基因克隆 | 第16-19页 |
| 1 材料和方法 | 第16-17页 |
| 1.1 材料 | 第16页 |
| 1.2 方法 | 第16-17页 |
| 1.2.1 特异性引物设计 | 第16页 |
| 1.2.2 spm-N基因PCR扩增 | 第16-17页 |
| 2 结果 | 第17-18页 |
| 2.1 重组质粒PCR鉴定结果 | 第17页 |
| 2.2 阳性克隆测序结果 | 第17-18页 |
| 3 讨论 | 第18-19页 |
| 实验二 阳性克隆原核表达载体的构建与表达 | 第19-23页 |
| 1 材料和方法 | 第19-21页 |
| 1.1 材料 | 第19页 |
| 1.2 方法 | 第19-21页 |
| 1.2.1 spm-N基因与pET30a(+)载体的连接与转化 | 第19-20页 |
| 1.2.2 目的基因与空载体的双酶切 | 第20页 |
| 1.2.3 目的片段与表达载体的连接 | 第20-21页 |
| 1.2.4 重组质粒的诱导表达 | 第21页 |
| 2 结果 | 第21-22页 |
| 2.1 重组质粒pET30a-spm-N的PCR扩增 | 第21-22页 |
| 2.2 重组质粒表达蛋白电泳结果 | 第22页 |
| 3 讨论 | 第22-23页 |
| 实验三 重组蛋白的纯化与多克隆抗体的制备 | 第23-27页 |
| 1 材料和方法 | 第23-24页 |
| 1.1 材料 | 第23页 |
| 1.2 方法 | 第23-24页 |
| 1.2.1 重组表达蛋白可溶性分析 | 第23页 |
| 1.2.2 重组表达蛋白的纯化 | 第23-24页 |
| 1.2.3 多克隆抗体的制备 | 第24页 |
| 2 结果 | 第24-26页 |
| 2.1 蛋白表达可溶性分析结果 | 第24-25页 |
| 2.2 蛋白纯化结果 | 第25页 |
| 2.3 重组蛋白反应原性检测结果 | 第25-26页 |
| 3 讨论 | 第26-27页 |
| 实验四 阳性克隆真核表达载体的构建及鉴定 | 第27-32页 |
| 1 材料和方法 | 第27-28页 |
| 1.1 材料 | 第27页 |
| 1.2 方法 | 第27-28页 |
| 1.2.1 spm-N基因与pGBKT7载体的连接与转化 | 第27页 |
| 1.2.2 重组质粒pGBKT7-spm-N转化酵母Y187 | 第27页 |
| 1.2.3 pGBKT7-spm-N自激活性检测 | 第27-28页 |
| 1.2.4 pGBKT7-spm-N对酵母Y187毒性检测 | 第28页 |
| 1.2.5 重组蛋白spm-N表达性检测 | 第28页 |
| 2 结果 | 第28-31页 |
| 2.1 真核表达载体pGBKT7-spm-N的构建结果 | 第28-29页 |
| 2.2 重组质粒pGBKT7-spm-N转化酵母Y187结果 | 第29-30页 |
| 2.3 重组质粒pGBKT7-spm-N自激活性检测结果 | 第30页 |
| 2.4 pGBKT7-spm-N对酵母Y187毒性检测结果 | 第30-31页 |
| 2.5 pGBKT7-spm-N在酵母细胞中的表达性检测结果 | 第31页 |
| 3 讨论 | 第31-32页 |
| 实验五 环形泰勒虫病间接ELISA诊断方法的建立 | 第32-40页 |
| 1 材料和方法 | 第32-35页 |
| 1.1 材料 | 第32页 |
| 1.2 方法 | 第32-35页 |
| 1.2.1 血清的采集 | 第32页 |
| 1.2.2 间接ELISA反应程序 | 第32-33页 |
| 1.2.3 间接ELISA诊断方法的初步建立 | 第33-34页 |
| 1.2.4 ELISA阳性阈值和特异性及敏感性检测 | 第34-35页 |
| 1.2.5 交叉实验 | 第35页 |
| 1.2.6 ELISA方法的应用 | 第35页 |
| 2 结果 | 第35-38页 |
| 2.1 间接ELISA诊断方法的初步建立结果 | 第35-37页 |
| 2.1.1 抗原和血清最佳稀释倍数的测定结果 | 第35-36页 |
| 2.1.2 酶标二抗最佳稀释倍数的测定结果 | 第36-37页 |
| 2.1.3 封闭液的选择结果 | 第37页 |
| 2.2 ELISA方法阳性阈值和特异性及敏感性检测结果 | 第37-38页 |
| 2.3 交叉反应检测结果 | 第38页 |
| 2.4 ELISA方法应用评价 | 第38页 |
| 3 讨论 | 第38-40页 |
| 结论 | 第40-41页 |
| 致谢 | 第41-42页 |
| 参考文献 | 第42-46页 |
| 作者简介 | 第46页 |
