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酿酒酵母细胞中影响蛋白激酶Rck2表达的基因筛选和分析

摘要第3-4页
Abstract第4页
第一章 绪论第7-14页
    1.1 酿酒酵母细胞第7-9页
        1.1.1 酵母细胞的简介第7页
        1.1.2 酿酒酵母基因组第7-8页
        1.1.3 酿酒酵母作为模式生物第8页
        1.1.4 酿酒酵母的基因缺失株文库第8-9页
    1.2 酿酒酵母细胞中的HOG途径第9-10页
    1.3 酿酒酵母细胞中的CWI途径第10-11页
    1.4 酿酒酵母细胞中RCK2基因的简介第11-13页
        1.4.1 RCK2基因的结构第11-12页
        1.4.2 RCK2基因的功能第12页
        1.4.3 RCK2基因结构与功能的关系第12-13页
    1.5 本论文研究的内容和意义第13-14页
第二章 实验材料与方法第14-30页
    2.1 实验材料第14-21页
        2.1.1 培养基的配置第14页
        2.1.2 所用试剂的配置第14-17页
        2.1.3 主要试剂第17-18页
        2.1.4 实验菌株、质粒和引物第18-21页
        2.1.5 主要仪器设备第21页
    2.2 实验方法第21-30页
        2.2.1 酸性玻璃珠法提取基因组第21-22页
        2.2.2 酿酒酵母片段DNA的转化(基因敲除)第22页
        2.2.3 LacZ质粒的构建第22-24页
        2.2.4 酿酒酵母质粒的转化第24-25页
        2.2.5 感受态细胞的电转化第25页
        2.2.6 倍比稀释法表型分析第25页
        2.2.7 考马斯亮蓝标准曲线的测定第25页
        2.2.8 β-半乳糖苷酶(LacZ)活性的测定第25-26页
        2.2.9 双基因缺失株的构建第26-27页
        2.2.10 Western Blot第27-30页
第三章 结果与讨论第30-47页
    3.1 酿酒酵母基因缺失菌株文库的筛选第30-37页
        3.1.1 利用Western Blot对文库的筛选结果第30-35页
        3.1.2 酿酒酵母中影响Rck2表达的基因的功能分析第35-37页
    3.2 13个基因缺失株中RCK2转录水平的检测第37-40页
        3.2.1 pRS316-RCK2-Lac Z质粒的构建第37-38页
        3.2.2 RCK2转录水平的测定第38-40页
    3.3 13个基因的缺失对HOG途径和CWI途径的影响第40-47页
        3.3.1 13个基因缺失株中Hog1磷酸化的检测第40页
        3.3.2 13个基因缺失株细胞对细胞壁压力的应答第40-41页
        3.3.3 镉胁迫下13个基因缺失株中Slt2磷酸化的检测第41-42页
        3.3.4 磷酸酯酶基因缺失对细胞壁胁迫及镉离子诱导下CWI途径的影响第42-47页
主要结论与展望第47-48页
    主要结论第47页
    展望第47-48页
致谢第48-49页
参考文献第49-53页
附录:作者在攻读硕士学位期间发表的论文第53页

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