摘要 | 第3-4页 |
Abstract | 第4页 |
第一章 绪论 | 第7-14页 |
1.1 酿酒酵母细胞 | 第7-9页 |
1.1.1 酵母细胞的简介 | 第7页 |
1.1.2 酿酒酵母基因组 | 第7-8页 |
1.1.3 酿酒酵母作为模式生物 | 第8页 |
1.1.4 酿酒酵母的基因缺失株文库 | 第8-9页 |
1.2 酿酒酵母细胞中的HOG途径 | 第9-10页 |
1.3 酿酒酵母细胞中的CWI途径 | 第10-11页 |
1.4 酿酒酵母细胞中RCK2基因的简介 | 第11-13页 |
1.4.1 RCK2基因的结构 | 第11-12页 |
1.4.2 RCK2基因的功能 | 第12页 |
1.4.3 RCK2基因结构与功能的关系 | 第12-13页 |
1.5 本论文研究的内容和意义 | 第13-14页 |
第二章 实验材料与方法 | 第14-30页 |
2.1 实验材料 | 第14-21页 |
2.1.1 培养基的配置 | 第14页 |
2.1.2 所用试剂的配置 | 第14-17页 |
2.1.3 主要试剂 | 第17-18页 |
2.1.4 实验菌株、质粒和引物 | 第18-21页 |
2.1.5 主要仪器设备 | 第21页 |
2.2 实验方法 | 第21-30页 |
2.2.1 酸性玻璃珠法提取基因组 | 第21-22页 |
2.2.2 酿酒酵母片段DNA的转化(基因敲除) | 第22页 |
2.2.3 LacZ质粒的构建 | 第22-24页 |
2.2.4 酿酒酵母质粒的转化 | 第24-25页 |
2.2.5 感受态细胞的电转化 | 第25页 |
2.2.6 倍比稀释法表型分析 | 第25页 |
2.2.7 考马斯亮蓝标准曲线的测定 | 第25页 |
2.2.8 β-半乳糖苷酶(LacZ)活性的测定 | 第25-26页 |
2.2.9 双基因缺失株的构建 | 第26-27页 |
2.2.10 Western Blot | 第27-30页 |
第三章 结果与讨论 | 第30-47页 |
3.1 酿酒酵母基因缺失菌株文库的筛选 | 第30-37页 |
3.1.1 利用Western Blot对文库的筛选结果 | 第30-35页 |
3.1.2 酿酒酵母中影响Rck2表达的基因的功能分析 | 第35-37页 |
3.2 13个基因缺失株中RCK2转录水平的检测 | 第37-40页 |
3.2.1 pRS316-RCK2-Lac Z质粒的构建 | 第37-38页 |
3.2.2 RCK2转录水平的测定 | 第38-40页 |
3.3 13个基因的缺失对HOG途径和CWI途径的影响 | 第40-47页 |
3.3.1 13个基因缺失株中Hog1磷酸化的检测 | 第40页 |
3.3.2 13个基因缺失株细胞对细胞壁压力的应答 | 第40-41页 |
3.3.3 镉胁迫下13个基因缺失株中Slt2磷酸化的检测 | 第41-42页 |
3.3.4 磷酸酯酶基因缺失对细胞壁胁迫及镉离子诱导下CWI途径的影响 | 第42-47页 |
主要结论与展望 | 第47-48页 |
主要结论 | 第47页 |
展望 | 第47-48页 |
致谢 | 第48-49页 |
参考文献 | 第49-53页 |
附录:作者在攻读硕士学位期间发表的论文 | 第53页 |