| 中文摘要 | 第11-13页 |
| ABSTRACT | 第13-14页 |
| 符号说明 | 第15-17页 |
| 第一章 绪论 | 第17-31页 |
| 1.1 糖类概述 | 第18-19页 |
| 1.1.1 糖的定义及分类 | 第18页 |
| 1.1.2 细菌表面多糖 | 第18-19页 |
| 1.2 大肠杆菌O抗原 | 第19-22页 |
| 1.2.1 大肠杆菌O抗原的结构 | 第19页 |
| 1.2.2 大肠杆菌O抗原合成过程 | 第19-20页 |
| 1.2.3 E.coli K-12 W3110 O抗原结构 | 第20-21页 |
| 1.2.4 Wzz简介 | 第21-22页 |
| 1.3 N-连接糖基化系统 | 第22-24页 |
| 1.3.1 真核生物N-连接糖基化 | 第22-23页 |
| 1.3.2 细菌N-连接糖基化 | 第23页 |
| 1.3.3 细菌OST-PglB | 第23-24页 |
| 1.4 一种新型的N-糖基转移酶 | 第24-27页 |
| 1.4.1 新型N-糖基转移酶的发现 | 第24-25页 |
| 1.4.2 新型N-糖基转移酶与传统Pgl系统的差别 | 第25-26页 |
| 1.4.3 ApNGT简介 | 第26-27页 |
| 1.4.4 ApNGT的酶学性质 | 第27页 |
| 1.5 同源重组技术 | 第27-29页 |
| 1.5.1 同源重组技术简介 | 第27-28页 |
| 1.5.2 同源重组技术应用 | 第28-29页 |
| 1.6 糖类疫苗研究 | 第29-31页 |
| 1.6.1 多糖疫苗 | 第29页 |
| 1.6.2 糖蛋白缀合物疫苗 | 第29-30页 |
| 1.6.3 生物法合成糖蛋白 | 第30-31页 |
| 第二章 新型的N-糖基转移酶的研究 | 第31-53页 |
| 2.1 引言 | 第31-32页 |
| 2.2 实验材料 | 第32-34页 |
| 2.2.1 菌株和载体 | 第32页 |
| 2.2.2 酶和耗材 | 第32页 |
| 2.2.3 培养基与缓冲液 | 第32-33页 |
| 2.2.4 仪器设备 | 第33-34页 |
| 2.3 实验方法 | 第34-41页 |
| 2.3.1 菌株构建及蛋白表达 | 第34-35页 |
| 2.3.2 ApNGT,AaNGT,BtNGT酶学性质的测定 | 第35-41页 |
| 2.3.2.1 高效液相色谱检测方法 | 第35-36页 |
| 2.3.2.2 酶活的初步检测 | 第36页 |
| 2.3.2.3 毛细管电泳检测水解UDP-Glc活性 | 第36-37页 |
| 2.3.2.4 AaNGT,BtNGT最适pH的检测 | 第37页 |
| 2.3.2.5 AaNGT,BtNGT最适温度的检测 | 第37-38页 |
| 2.3.2.6 不同金属离子对AaNGT,BtNGT酶活性的影响 | 第38页 |
| 2.3.2.7 AaNGT,BtNGT糖基供体底物特异性的探究 | 第38-39页 |
| 2.3.2.8 AaNGT,BtNGT对UDP-Glc的动力学参数测定 | 第39-41页 |
| 2.3.2.8.1 动力学参数测定中反应条件的确定 | 第39-40页 |
| 2.3.2.8.2 AaNGT,BtNGT对UDP-Glc的动力学参数测定 | 第40-41页 |
| 2.4 实验结果与讨论 | 第41-51页 |
| 2.4.1 成功构建表达菌株 | 第41页 |
| 2.4.2 AaNGT,BtNGT与ApNGT酶的表达与纯化 | 第41-42页 |
| 2.4.3 AaNGT,BtNGT与ApNGT酶的蛋白浓度的测定 | 第42-43页 |
| 2.4.4 AaNGT,BtNGT与ApNGT酶活的初步测定 | 第43-45页 |
| 2.4.5 AaNGT,BtNGT水解UDP-Glc活性的测定 | 第45-46页 |
| 2.4.6 AaNGT与BtNGT最适pH的测定 | 第46-47页 |
| 2.4.7 AaNGT与BtNGT最适温度的测定 | 第47-48页 |
| 2.4.8 金属离子对AaNGT与BtNGT酶活的影响 | 第48-49页 |
| 2.4.9 AaNGT与BtNGT糖基供体底物特异性的研究 | 第49-50页 |
| 2.4.10 AaNGT与BtNGT对UDP-Glc动力学参数的测定 | 第50-51页 |
| 2.5 本章小节 | 第51-53页 |
| 第三章 生物发酵法一步生产糖蛋白 | 第53-60页 |
| 3.1 引言 | 第53页 |
| 3.2 实验材料 | 第53-54页 |
| 3.2.1 菌株和载体 | 第53-54页 |
| 3.2.2 酶和耗材 | 第54页 |
| 3.2.3 培养基与缓冲液 | 第54页 |
| 3.2.4 仪器设备 | 第54页 |
| 3.3 实验方法 | 第54-56页 |
| 3.3.1 构建菌株E.coli W3110 △waal pBAD24-mbp pACT3-pglb | 第54-55页 |
| 3.3.2 表达蛋白MBP-GlcNAc并进行验证 | 第55页 |
| 3.3.3 验证MBP-GlcNAc | 第55-56页 |
| 3.4 实验结果与讨论 | 第56-59页 |
| 3.4.1 构建菌株E.coli W3110 △waal pBAD24-mbp pACT3-pglb | 第56页 |
| 3.4.2 表达蛋白MBP-GlcNAc并初步验证 | 第56-57页 |
| 3.4.3 验证MBP-GlcNAc | 第57-59页 |
| 3.5 本章小结 | 第59-60页 |
| 第四章 调控糖蛋白糖链长度的初步探索 | 第60-67页 |
| 4.1 引言 | 第60页 |
| 4.2 实验材料 | 第60-61页 |
| 4.2.1 菌株和载体 | 第60-61页 |
| 4.2.2 酶和耗材 | 第61页 |
| 4.2.3 培养基与缓冲液 | 第61页 |
| 4.2.4 仪器设备 | 第61页 |
| 4.3 实验方法 | 第61-64页 |
| 4.3.1 ccdB反向筛选技术改造质粒 | 第61-62页 |
| 4.3.2 同源重组构建质粒 | 第62-64页 |
| 4.4 实验结果与讨论 | 第64-66页 |
| 4.4.1 ccdB反向筛选技术改造质粒 | 第64页 |
| 4.4.2 同源重组构建质粒 | 第64-66页 |
| 4.5 本章小结 | 第66-67页 |
| 全文总结 | 第67-70页 |
| 参考文献 | 第70-74页 |
| 致谢 | 第74-75页 |
| 学位论文评阅及答辩情况表 | 第75页 |
