| 摘要 | 第5-8页 |
| ABSTRACT | 第8-11页 |
| 第一章 绪论 | 第16-36页 |
| 1.1 ROR α | 第16-19页 |
| 1.1.1 RORα的分布 | 第16-17页 |
| 1.1.2 RORα的结构 | 第17页 |
| 1.1.3 RORα的配体 | 第17-18页 |
| 1.1.4 与RORα相关的疾病 | 第18-19页 |
| 1.2 ILC2s细胞 | 第19-21页 |
| 1.2.1 ILC2s细胞的发现 | 第19页 |
| 1.2.2 ILC2s细胞的来源 | 第19-20页 |
| 1.2.3 ILC2s细胞的特点 | 第20-21页 |
| 1.2.4 ILC2s分化过程中的转录因子 | 第21页 |
| 1.2.5 RORα对ILC2s的作用 | 第21页 |
| 1.3 ILC2s与哮喘 | 第21-25页 |
| 1.3.1 小鼠中ILC2s与哮喘的关系 | 第21-23页 |
| 1.3.2 人类中ILC2s与哮喘的关系 | 第23-25页 |
| 1.3.3 RORα参与ILC2s促进哮喘的进程 | 第25页 |
| 1.4 CD4~+T细胞与哮喘 | 第25-28页 |
| 1.4.1 Th2细胞与哮喘 | 第25-27页 |
| 1.4.2 Th17细胞与哮喘 | 第27-28页 |
| 1.4.3 Th9细胞与哮喘 | 第28页 |
| 1.5 CD8~+T细胞与哮喘 | 第28页 |
| 1.6 哮喘的新的有力的治疗战略 | 第28-29页 |
| 1.6.1 目前治疗战略的局限性 | 第28页 |
| 1.6.2 靶点细胞因子 | 第28-29页 |
| 1.6.3 促进Treg细胞应答 | 第29页 |
| 1.6.4 控制二型免疫应答 | 第29页 |
| 1.7 基因治疗 | 第29-33页 |
| 1.7.1 腺病毒载体 | 第30-32页 |
| 1.7.2 腺相关病毒载体 | 第32页 |
| 1.7.3 逆转录病毒载体 | 第32页 |
| 1.7.4 非病毒载体 | 第32-33页 |
| 1.8 支气管哮喘实验动物模型的研究进展 | 第33-34页 |
| 1.8.1 动物品种的选择 | 第33页 |
| 1.8.2 动物性别的差异 | 第33页 |
| 1.8.3 致敏原的选择 | 第33-34页 |
| 1.9 本论文研究的目的、方法、意义、及实验方案的设计 | 第34-36页 |
| 1.9.1 主要研究内容 | 第34页 |
| 1.9.2 研究方法及技术 | 第34页 |
| 1.9.3 研究意义 | 第34-35页 |
| 1.9.4 技术路线 | 第35-36页 |
| 第二章 哮喘病人外周血ILC2s的含量及各因子的检测 | 第36-49页 |
| 2.1 材料 | 第37-38页 |
| 2.1.1 实验对象 | 第37页 |
| 2.1.2 实验试剂 | 第37-38页 |
| 2.1.3 溶液配制 | 第38页 |
| 2.1.4 实验耗材 | 第38页 |
| 2.2 实验方法 | 第38-42页 |
| 2.2.1 人外周血单个核细胞的分离 | 第38-39页 |
| 2.2.2 流式细胞术检测PBMC中ILC2s的百分百 | 第39页 |
| 2.2.3 RNA的提取 | 第39-40页 |
| 2.2.4 逆转录合成CDNA | 第40页 |
| 2.2.5 设计及合成引物 | 第40-41页 |
| 2.2.6 Elisa检测血清中IL-33、IL-13及IL-5的含量 | 第41页 |
| 2.2.7 统计分析 | 第41-42页 |
| 2.2.8 统计分析 | 第42页 |
| 2.3 结果 | 第42-47页 |
| 2.3.1 哮喘病人以及健康对照者PBMC中ILC2s的比例 | 第42-43页 |
| 2.3.2 外周血中IL-33的表达 | 第43-44页 |
| 2.3.3 ILC2s的转录因子RORα的改变 | 第44页 |
| 2.3.4 外周血中ILC2s相关细胞因子蛋白和mRNA的表达 | 第44-45页 |
| 2.3.5 Th2细胞的转录因子GATA3及Th1细胞的转录因子T-bet的表达 | 第45-46页 |
| 2.3.6 RORα与IL-13、IL-5以及GATA3、T-bet的相关性分析 | 第46页 |
| 2.3.7 IL-13、IL-5与GATA3的相关性分析 | 第46-47页 |
| 2.4 讨论 | 第47-49页 |
| 第三章 mROR α基因腺病毒载体的构建 | 第49-68页 |
| 3.1 材料 | 第50-52页 |
| 3.1.1 实验动物 | 第50页 |
| 3.1.2 主要仪器 | 第50页 |
| 3.1.3 主要试剂 | 第50-51页 |
| 3.1.4 溶液配置 | 第51-52页 |
| 3.1.5 菌株、细胞株 | 第52页 |
| 3.1.6 质粒 | 第52页 |
| 3.2 实验方法 | 第52-61页 |
| 3.2.1 大肠埃希菌DH5α感受态的制备 | 第52-53页 |
| 3.2.2 小鼠RORα基因的克隆 | 第53-58页 |
| 3.2.3 含mROR α基因的腺病毒骨架载体的构建 | 第58-61页 |
| 3.3 结果 | 第61-65页 |
| 3.3.1 小鼠RORα基因的克隆 | 第61-62页 |
| 3.3.2 mRORα基因与Pdc316-mCMV-EGFP载体的连接 | 第62-63页 |
| 3.3.3 Pdc316-ROR α -mCMV-EGFP质粒的鉴定 | 第63-65页 |
| 3.4 讨论 | 第65-68页 |
| 第四章 pDC316-mROR α -mCMV-EGFP腺病毒和对照病毒的包装 | 第68-78页 |
| 4.1 材料 | 第68-69页 |
| 4.1.1 主要仪器 | 第68页 |
| 4.1.2 实验试剂 | 第68-69页 |
| 4.2 实验方法 | 第69-72页 |
| 4.2.1 质粒的大量提取 | 第69-70页 |
| 4.2.2 HEK293细胞的复苏、传代和冻存 | 第70页 |
| 4.2.3 用Polyfectine转染至细胞 | 第70-71页 |
| 4.2.4 病毒母液的收集 | 第71页 |
| 4.2.5 病毒的扩增 | 第71页 |
| 4.2.6 病毒的鉴定 | 第71-72页 |
| 4.3 结果 | 第72-75页 |
| 4.3.1 穿梭载体pDC316-mROR α -mCMV-EGFP以及骨架质粒PBHGIoxdetalE1,3Cre共转染HEK293细胞 | 第72-74页 |
| 4.3.2 腺病毒的扩增 | 第74页 |
| 4.3.3 ROR α于HEK293细胞中的表达 | 第74-75页 |
| 4.4 讨论 | 第75-78页 |
| 第五章 哮喘小鼠模型的诱导及外源性RORα的影响 | 第78-87页 |
| 5.1 材料 | 第78-79页 |
| 5.1.1 实验动物 | 第78页 |
| 5.1.2 主要仪器 | 第78-79页 |
| 5.1.3 主要试剂 | 第79页 |
| 5.1.4 溶液配置 | 第79页 |
| 5.2 实验方法 | 第79-82页 |
| 5.2.1 哮喘模型组及干预组的建立 | 第80页 |
| 5.2.2 标本的采集 | 第80-81页 |
| 5.2.3 Elisa法检测外周血血清中IgE的含量 | 第81页 |
| 5.2.4 肺组织H&E染色 | 第81-82页 |
| 5.2.5 统计学分析 | 第82页 |
| 5.3 实验结果 | 第82-84页 |
| 5.3.1 雾化激发时小鼠的反应 | 第82页 |
| 5.3.2 小鼠血清中IgE的含量 | 第82-83页 |
| 5.3.3 肺组织H&E染色结果 | 第83-84页 |
| 5.4 讨论 | 第84-87页 |
| 第六章 ILC2s相关因子的检测及其促进哮喘的可能机制 | 第87-105页 |
| 6.1 材料 | 第88-89页 |
| 6.1.1 主要仪器 | 第88页 |
| 6.1.2 主要试剂 | 第88-89页 |
| 6.1.3 溶液配置 | 第89页 |
| 6.2 实验方法 | 第89-94页 |
| 6.2.1 PBMC的分离 | 第89页 |
| 6.2.2 流式细胞术检测PBMC中ILC2s的比例 | 第89-90页 |
| 6.2.3 RNA的提取 | 第90页 |
| 6.2.4 逆转录合成cDNA | 第90-91页 |
| 6.2.5 设计及合成引物 | 第91页 |
| 6.2.6 荧光定量PCR检测各基因的mRNA水平 | 第91-92页 |
| 6.2.7 Elisa检测血清中IL-33、I-13及IL-5蛋白的表达 | 第92-93页 |
| 6.2.8 免疫荧光检测肺组织RORα的表达 | 第93页 |
| 6.2.9 western-blot检测肺组织RORα、ST2的表达 | 第93-94页 |
| 6.3 结果 | 第94-100页 |
| 6.3.1 各组小鼠PBMC中ILC2s的比例 | 第94-95页 |
| 6.3.2 小鼠PBMC中RORα、GATA3、T-bet的水平 | 第95-97页 |
| 6.3.3 RORα干预促进小鼠肺组织和BALF中ILC2s表面受体的表达 | 第97页 |
| 6.3.4 RORα的干预促进BALF中嗜酸性粒细胞的富集 | 第97-98页 |
| 6.3.5 RORα干预促进外周血和BALF中IL-33的蛋白水平的上调 | 第98页 |
| 6.3.6 RORα干预促进肺组织RORα和ST2蛋白的表达 | 第98-99页 |
| 6.3.7 RORα的干预促进ILC2s特征性细胞因子的上调 | 第99-100页 |
| 6.4 讨论 | 第100-105页 |
| 第七章 主要结论与展望 | 第105-107页 |
| 7.1 主要结论 | 第105-106页 |
| 7.2 主要创新点 | 第106页 |
| 7.3 展望 | 第106-107页 |
| 参考文献 | 第107-117页 |
| 主要引物缩略词索引 | 第117-118页 |
| 致谢 | 第118-120页 |
| 攻读博士期间发表的论文 | 第120页 |
