| 摘要 | 第4-6页 |
| ABSTRACT | 第6-7页 |
| 缩略语对照表 | 第8-14页 |
| 第一章 绪论 | 第14-29页 |
| 1.1 糖鞘脂概述 | 第14-19页 |
| 1.1.1 糖鞘脂的结构与命名 | 第14-15页 |
| 1.1.2 糖鞘脂的分布特征与多样性 | 第15页 |
| 1.1.3 糖鞘脂代谢 | 第15-16页 |
| 1.1.4 糖鞘脂的生物学功能 | 第16-19页 |
| 1.2 糖鞘脂研究分析技术的发展 | 第19-23页 |
| 1.2.1 薄层色谱 | 第19-20页 |
| 1.2.2 高效液相色谱 | 第20-21页 |
| 1.2.3 质谱及色谱-质谱技术的联用 | 第21-23页 |
| 1.3 糖鞘脂在疾病中的研究 | 第23-26页 |
| 1.3.1 糖鞘脂与癌症 | 第23-26页 |
| 1.3.2 糖鞘脂与神经性疾病 | 第26页 |
| 1.3.3 糖鞘脂与溶酶体贮积症 | 第26页 |
| 1.4 糖组学与糖鞘脂 | 第26-28页 |
| 1.4.1 糖组学的研究内容 | 第26-27页 |
| 1.4.2 凝集素芯片概述 | 第27页 |
| 1.4.3 生物芯片在糖鞘脂研究中的应用 | 第27-28页 |
| 1.5 本课题的研究目的与意义 | 第28-29页 |
| 第二章 凝集素芯片技术检测糖鞘脂糖链谱方法的建立 | 第29-50页 |
| 2.1 引言 | 第29-30页 |
| 2.2 实验材料与仪器 | 第30-33页 |
| 2.2.1 实验主要试剂与耗材 | 第30-31页 |
| 2.2.2 实验主要仪器 | 第31-32页 |
| 2.2.3 实验主要溶液的配制 | 第32-33页 |
| 2.3 实验方法 | 第33-42页 |
| 2.3.1 糖鞘脂标准品GM1a的亲水化处理 | 第33-34页 |
| 2.3.2 酶切后Lyso-GM1a的分离纯化 | 第34页 |
| 2.3.3 TLC检验酶切结果 | 第34-35页 |
| 2.3.4 用地衣酚-硫酸法定量检测Lyso-GM1a糖链 | 第35-36页 |
| 2.3.5 Lyso-GM1a的Cy3荧光染料标记与纯化条件探究 | 第36-37页 |
| 2.3.6 凝集素芯片的设计与制备 | 第37-40页 |
| 2.3.7 使用凝集素芯片检测GM1a糖链及相关条件的优化 | 第40-41页 |
| 2.3.8 凝集素芯片检测糖鞘脂糖链相关条件的选择与优化 | 第41-42页 |
| 2.4 实验结果与讨论 | 第42-48页 |
| 2.4.1 糖鞘脂GM1a在SCDase作用下的酶解 | 第42-43页 |
| 2.4.2 Lyso-GM1a糖链的定量结果 | 第43-44页 |
| 2.4.3 糖鞘脂样本Cy3-Lyso-GM1a纯化条件的选择 | 第44-45页 |
| 2.4.4 糖鞘脂凝集素芯片最佳上样浓度的选择 | 第45页 |
| 2.4.5 糖鞘脂凝集素芯片封闭缓冲液的优化 | 第45-46页 |
| 2.4.6 糖鞘脂凝集素芯片孵育缓冲液的优化 | 第46-47页 |
| 2.4.7 糖鞘脂凝集素芯片孵育时间的选择 | 第47-48页 |
| 2.5 本章小结 | 第48-50页 |
| 第三章 HepG2和HL-7702细胞系糖鞘脂糖链谱的分析 | 第50-75页 |
| 3.1 引言 | 第50-51页 |
| 3.2 实验材料与仪器 | 第51-55页 |
| 3.2.1 实验主要试剂与耗材 | 第51-53页 |
| 3.2.2 实验主要仪器 | 第53-54页 |
| 3.2.3 实验主要溶液的配制 | 第54-55页 |
| 3.3 实验方法 | 第55-61页 |
| 3.3.1 HepG2和HL-7702细胞的培养 | 第55-56页 |
| 3.3.2 细胞总糖鞘脂的提取和纯化 | 第56-58页 |
| 3.3.3 细胞酸性、中性糖鞘脂的提取、分离和纯化 | 第58-60页 |
| 3.3.4 细胞糖鞘脂的亲水化处理、Cy3荧光染料标记与纯化 | 第60页 |
| 3.3.5 细胞糖鞘脂的定量 | 第60-61页 |
| 3.3.6 凝集素芯片检测细胞糖鞘脂糖链 | 第61页 |
| 3.3.7 数据的获取与分析 | 第61页 |
| 3.4 实验结果与讨论 | 第61-73页 |
| 3.4.1 HepG2和HL-7702细胞糖鞘脂的定量结果 | 第61页 |
| 3.4.2 HepG2和HL-7702细胞总糖鞘脂糖链谱的分析 | 第61-66页 |
| 3.4.3 HepG2和HL-7702细胞中性、酸性糖鞘脂糖链谱的分析 | 第66-73页 |
| 3.5 本章小结 | 第73-75页 |
| 第四章 肝癌患者和健康志愿者血清糖鞘脂糖链谱的分析 | 第75-93页 |
| 4.1 引言 | 第75-76页 |
| 4.2 实验材料与仪器 | 第76-79页 |
| 4.2.1 实验主要试剂与耗材 | 第76-77页 |
| 4.2.2 实验主要仪器 | 第77-78页 |
| 4.2.3 实验主要溶液的配制 | 第78-79页 |
| 4.3 实验方法 | 第79-83页 |
| 4.3.1 研究人群与血清的采集 | 第79-80页 |
| 4.3.2 使用GOD去除血清中的葡萄糖 | 第80页 |
| 4.3.3 血清中性、酸性糖鞘脂的提取、分离和纯化 | 第80-82页 |
| 4.3.4 未经GOD处理的血清糖鞘脂的提取 | 第82页 |
| 4.3.5 细胞糖鞘脂的亲水化处理、Cy3荧光染料标记与纯化 | 第82-83页 |
| 4.3.6 血清糖鞘脂的定量 | 第83页 |
| 4.3.7 凝集素芯片检测血清糖鞘脂糖链 | 第83页 |
| 4.3.8 数据的获取与分析 | 第83页 |
| 4.4 实验结果与讨论 | 第83-91页 |
| 4.4.1 肝癌患者血清和健康志愿者血清糖鞘脂的定量结果 | 第83-84页 |
| 4.4.2 使用GOD处理血清对凝集素芯片检测糖鞘脂糖链的影响 | 第84页 |
| 4.4.3 肝癌患者血清和健康志愿者血清中、酸性糖鞘脂糖链谱的分析 | 第84-91页 |
| 4.5 本章小结 | 第91-93页 |
| 全文总结 | 第93-96页 |
| 参考文献 | 第96-105页 |
| 致谢 | 第105-106页 |
| 攻读硕士学位期间取得的科研成果 | 第106页 |
