| 中文摘要 | 第8-10页 |
| 英文摘要 | 第10-12页 |
| 引言 | 第13-15页 |
| 第一部分 Wnt/β-catenin信号通路在COPD不同中医证型表达的研究(临床实验) | 第15-38页 |
| 1 实验材料 | 第15-19页 |
| 1.1 患者临床资料 | 第15-18页 |
| 1.2 实验药品及主要试剂 | 第18页 |
| 1.3 主要仪器及设备 | 第18-19页 |
| 1.4 常用溶液配制 | 第19页 |
| 2 方法 | 第19-24页 |
| 2.1 实时荧光定量PCR检测β-catenin基因在COPD患者中的表达 | 第19-24页 |
| 2.1.1 血液总RNA的提取 | 第19-20页 |
| 2.1.2 RNA完整性及纯度测定 | 第20-21页 |
| 2.1.3 Realtime PCR反应 | 第21-24页 |
| 2.1.3.1 RT反转录反应 | 第21页 |
| 2.1.3.2 Realtime PCR反应 | 第21-24页 |
| 2.2 肺功能检测方法及主要观察指标 | 第24页 |
| 2.3 血气分析检测方法及主要观察指标 | 第24页 |
| 3 统计学方法 | 第24-25页 |
| 4 结果 | 第25-32页 |
| 4.1 RNA完整性及纯度、浓度测定结果 | 第25页 |
| 4.2 Realtime PCR检测患者血液β-catenin基因表达 | 第25-28页 |
| 4.2.1 β-catenin、GAPDH基因标准曲线 | 第25-26页 |
| 4.2.2 β-catenin、GAPDH基因扩增曲线图、溶解曲线图 | 第26-28页 |
| 4.3 β-catenin基因在不同中医证型表达的研究 | 第28-30页 |
| 4.4 β-catenin基因与COPD进展相关性研究 | 第30-32页 |
| 4.4.1 慢阻肺综合评估A、B、C、D组性别构成比较 | 第30-31页 |
| 4.4.2 慢阻肺综合评估A、B、C、D组年龄构成 | 第31页 |
| 4.4.3 血液β-catenin基因在慢阻肺综合评估A、B、C、D组中的表达 | 第31-32页 |
| 4.4.4 研究患者血液β-cateni.n基因表达与FEV_1、FEV_1/FVC相关性 | 第32页 |
| 4.4.5 研究COPD患者血液β-catenin基因表达与PaO_2、PaCO_2相关性 | 第32页 |
| 5 讨论 | 第32-36页 |
| 总结与展望 | 第36-37页 |
| 参考文献 | 第37-38页 |
| 第二部分 Wnt/β-catenin信号通路与HSG相关性研究(动物实验) | 第38-96页 |
| 1 实验材料 | 第38-42页 |
| 1.1 实验动物 | 第38页 |
| 1.2 实验药品及主要试剂 | 第38-40页 |
| 1.3 主要仪器及设备 | 第40-41页 |
| 1.4 常用溶液配制 | 第41-42页 |
| 2 方法 | 第42-58页 |
| 2.1 COPD大鼠模型建立 | 第42-44页 |
| 2.1.1 实验分组 | 第42页 |
| 2.1.2 造模方法 | 第42-43页 |
| 2.1.3 肺组织病理学改变 | 第43-44页 |
| 2.1.3.1 肺组织石蜡块制备 | 第43页 |
| 2.1.3.2 HE染色 | 第43-44页 |
| 2.1.3.3 HE染色结果判断方法 | 第44页 |
| 2.1.4 实验观察指标 | 第44页 |
| 2.1.4.1 COPD大鼠模型构建成功参考标准 | 第44页 |
| 2.2 大鼠气道成纤维细胞培养 | 第44-47页 |
| 2.2.1 取材 | 第44页 |
| 2.2.2 气道成纤维细胞的原代培养 | 第44-45页 |
| 2.2.3 气道成纤维细胞的传代培养 | 第45页 |
| 2.2.4 细胞计数 | 第45页 |
| 2.2.5 时差贴壁法纯化成纤维细胞 | 第45-46页 |
| 2.2.6 成纤维细胞的鉴定 | 第46页 |
| 2.2.7 细胞冻存 | 第46页 |
| 2.2.8 细胞复苏 | 第46-47页 |
| 2.2.9 实验观察指标 | 第47页 |
| 2.2.9.1 大鼠气道成纤维细胞原代培养成功参考标准 | 第47页 |
| 2.3 Realtime PCR检测成纤维细胞HSG、β-catenin基因表达 | 第47-51页 |
| 2.3.1 细胞总RNA的提取 | 第47-48页 |
| 2.3.2 RNA的完整性及纯度、浓度测定 | 第48-49页 |
| 2.3.3 Realtime PCR反应 | 第49-51页 |
| 2.3.3.1 RT反转录反应 | 第49-50页 |
| 2.3.3.2 Realtime PCR反应 | 第50-51页 |
| 2.4 免疫组化检测肺组织β-catenin表达 | 第51-53页 |
| 2.4.1 免疫组化实验步骤 | 第51-52页 |
| 2.4.2 免疫组化染色结果的判断和分析 | 第52-53页 |
| 2.4.2.1 β-Catenin判定标准 | 第52页 |
| 2.4.2.2 气道肺组织-Catenin免疫组化阳性着色面积 | 第52-53页 |
| 2.5 蛋白免疫印迹法检测成纤维细胞HSG、β-Catenin、GSK-3β蛋白表达 | 第53-57页 |
| 2.5.1 成纤维细胞蛋白提取 | 第53-54页 |
| 2.5.1.1 细胞总蛋白提取 | 第53页 |
| 2.5.1.2 细胞浆蛋白、细胞核蛋白提取 | 第53-54页 |
| 2.5.2 BCA蛋白定量试剂盒测定蛋白浓度 | 第54-55页 |
| 2.5.3 免疫印迹法(Western blot)检测 | 第55-57页 |
| 2.6 ELISA检测成纤维细胞细胞因子TGF-β1、MMP-9表达 | 第57-58页 |
| 3 统计学方法 | 第58页 |
| 4 结果 | 第58-81页 |
| 4.1 COPD大鼠模型构建 | 第58-62页 |
| 4.1.1 症状观察 | 第58-59页 |
| 4.1.2 肺组织解剖大体观 | 第59页 |
| 4.1.3 HE染色 | 第59-61页 |
| 4.1.4 大鼠肺组织小气道WAt/Pbm测定结果 | 第61页 |
| 4.1.5 大鼠死亡情况 | 第61-62页 |
| 4.2 大鼠气道成纤维细胞原代培养及鉴定 | 第62-64页 |
| 4.2.1 大鼠气道成纤维细胞原代培养 | 第62-63页 |
| 4.2.2 成纤维细胞纯化及鉴定 | 第63-64页 |
| 4.3 RNA完整性及纯度测定结果 | 第64页 |
| 4.4 Realtime PCR检测成纤维细胞HSG、β-catenin基因表达 | 第64-68页 |
| 4.4.1 HSG、β-catenin、β-actin基因标准曲线 | 第64-66页 |
| 4.4.2 HSG、β-catenin、β-actin基因扩增曲线图、溶解曲线图 | 第66-68页 |
| 4.5 成纤维细胞HSG、β-catenin mRNA相对表达量的变化 | 第68-70页 |
| 4.6 免疫组化检测结果 | 第70-72页 |
| 4.7 Western Blot检测蛋白表达 | 第72-76页 |
| 4.7.1 Western Blot检测HSG (Anti-Mitofusin)蛋白表达 | 第72-73页 |
| 4.7.2 Western Blot检测β-Catenin蛋白表达 | 第73-75页 |
| 4.7.3 Western Blot检测GSK-3 β蛋白表达 | 第75-76页 |
| 4.8 ELISA检测TGF-β1、MMP-9表达变化 | 第76-79页 |
| 4.8.1 成纤维细胞TGF-β1水平测定 | 第76-77页 |
| 4.8.2 成纤维细胞MMP-9水平测定 | 第77-79页 |
| 4.9 HSG、β-catenin基因表达与TGF-β1、MMP-9细胞因子分泌的相关性分析 | 第79-81页 |
| 4.9.1 HSG mRNA表达与TGF-β1、MMP-9细胞因子相关性 | 第79页 |
| 4.9.2 β-catenin mRNA表达与TGF-β1、MMP-9细胞因子相关性 | 第79-80页 |
| 4.9.3 HSG mRNA表达与β-catenin mRNA相关性 | 第80-81页 |
| 5 讨论 | 第81-93页 |
| 结论与展望 | 第93-94页 |
| 参考文献 | 第94-96页 |
| 附录一 缩略语表 | 第96-97页 |
| 附录二 综述 Wnt信号通路生物学效应及其与COPD气道重建的关系 | 第97-104页 |
| 参考文献 | 第102-104页 |
| 附录三 致谢 | 第104-105页 |
| 附录四 个人简介 | 第105页 |
