‘丰产梨PcAFS基因沉默的稳定性评价及其启动子研究
| 中文摘要 | 第1-10页 |
| Abstract | 第10-13页 |
| 1 前言 | 第13-26页 |
| ·α-法尼烯与虎皮病 | 第13-19页 |
| ·虎皮病简介 | 第13-14页 |
| ·α-法尼烯氧化假说 | 第14-18页 |
| ·α-法尼烯的产生 | 第14-16页 |
| ·α-法尼烯氧化产物 | 第16-18页 |
| ·虎皮病的研究现状 | 第18-19页 |
| ·RNA干扰技术 | 第19-24页 |
| ·RNA干扰的发现 | 第19-20页 |
| ·RNA干扰的基本原理 | 第20-23页 |
| ·参与RNA干扰的小RNA分子 | 第20-21页 |
| ·参与RNA干扰的主要蛋白 | 第21-22页 |
| ·链选择性与RISC的组装 | 第22-23页 |
| ·RNA干扰的传递性 | 第23-24页 |
| ·本研究的目的意义 | 第24-26页 |
| 2 材料与方法 | 第26-38页 |
| ·实验材料 | 第26-27页 |
| ·植物材料 | 第26页 |
| ·菌株与质粒 | 第26页 |
| ·酶及生化试剂 | 第26页 |
| ·PCR引物 | 第26-27页 |
| ·实验方法 | 第27-38页 |
| ·基因组水平鉴定 | 第27-28页 |
| ·CTAB法提取植物叶片基因组DNA | 第27-28页 |
| ·PCR扩增 | 第28页 |
| ·转录水平鉴定 | 第28-30页 |
| ·总RNA提取 | 第28-29页 |
| ·cDNA第一链的合成 | 第29页 |
| ·实时荧光定量PCR | 第29-30页 |
| ·α-法尼烯含量测定 | 第30-31页 |
| ·萜类合成途径关键基因的克隆与检测 | 第31页 |
| ·西洋梨萜类合成途径关键基因的克隆 | 第31页 |
| ·关键酶基因表达水平的荧光定量PCR分析 | 第31页 |
| ·α-法尼烯合酶基因启动子克隆与分析 | 第31-35页 |
| ·TAIL-PCR扩增α-法尼烯合酶基因启动子 | 第31-33页 |
| ·PcAFS基因启动子表达载体的构建 | 第33-34页 |
| ·农杆菌介导法转化烟草 | 第34-35页 |
| ·转基因植株生理指标测定 | 第35-38页 |
| ·叶绿素和类胡萝卜素含量的测定 | 第35页 |
| ·H2O2含量的测定 | 第35页 |
| ·DAB和NBT染色 | 第35页 |
| ·MDA含量的测定 | 第35-36页 |
| ·抗氧化酶活性的测定 | 第36页 |
| ·光合指标和叶绿素荧光参数的测定 | 第36-37页 |
| ·转基因植株GUS染色 | 第37页 |
| ·组培苗的继代、生根及日常管理 | 第37-38页 |
| 3 结果与分析 | 第38-59页 |
| ·转基因植株的鉴定及稳定性评价 | 第38-42页 |
| ·基因组水平鉴定 | 第38-39页 |
| ·转录水平鉴定 | 第39-41页 |
| ·α-法尼烯等挥发物质的测定 | 第41-42页 |
| ·沉默PcAFS对其上游关键基因表达的影响 | 第42-44页 |
| ·抑制α-法尼烯对其他萜类物质产生的影响 | 第44-47页 |
| ·转基因植株的非生物胁迫抗性测定 | 第47-49页 |
| ·转基因植株的抗氧化能力检测 | 第47页 |
| ·转基因植株的抗高温能力检测 | 第47-49页 |
| ·沉默效应在砧木与接穗间的传递 | 第49-51页 |
| ·PcAFS表达模式分析与启动子研究 | 第51-59页 |
| ·PcAFS基因的表达模式分析 | 第51-52页 |
| ·α-法尼烯合酶基因启动子的克隆 | 第52-56页 |
| ·5'端系列删除载体的构建和烟草转化 | 第56-57页 |
| ·转基因烟草的PCR鉴定 | 第57页 |
| ·转基因烟草GUS组织化学染色分析 | 第57-59页 |
| 4 讨论 | 第59-65页 |
| 5 结论 | 第65-66页 |
| 参考文献 | 第66-76页 |
| 致谢 | 第76-77页 |
| 攻读学位期间发表论文情况 | 第77页 |
