| 摘要 | 第1-7页 |
| Abstract | 第7-14页 |
| 第一篇 人类胚胎干细胞5-羟甲基胞嘧啶识别蛋白 HMCES的结构初探 | 第14-52页 |
| 第一章 研究背景概述 | 第14-20页 |
| ·表观遗传学简介 | 第14-15页 |
| ·DNA的甲基化 | 第15-16页 |
| ·DNA的去甲基化与5-羟甲基胞嘧啶 | 第16-18页 |
| ·5hmC的识别蛋白HMCES | 第18-20页 |
| 第二章 实验材料与方法 | 第20-38页 |
| ·材料 | 第20-22页 |
| ·质粒,菌类及酶类 | 第20页 |
| ·试剂盒 | 第20页 |
| ·试剂 | 第20-22页 |
| ·仪器设备 | 第22页 |
| ·方法 | 第22-38页 |
| ·基因克隆和载体构建 | 第22-29页 |
| ·引物设计 | 第22-24页 |
| ·PCR扩增 | 第24-25页 |
| ·目的基因片段鉴定回收,双酶切及连接载体 | 第25-27页 |
| ·感受态细胞的制备 | 第27页 |
| ·连接产物转化 | 第27-28页 |
| ·挑单克隆和质粒抽提、鉴定 | 第28-29页 |
| ·HMCES及HMCES-MBP蛋白的表达鉴定 | 第29-30页 |
| ·转化Rosetta菌株 | 第29页 |
| ·挑单克隆 | 第29页 |
| ·保菌、取样、诱导和鉴定表达 | 第29-30页 |
| ·HMCES-MBP蛋白纯化 | 第30-32页 |
| ·扩大培养 | 第30页 |
| ·诱导收菌破碎 | 第30页 |
| ·Ni-NTA亲和柱纯化HMCES-MBP蛋白 | 第30-31页 |
| ·TEV酶酶切除MBP助溶标签 | 第31-32页 |
| ·HMCES蛋白纯化 | 第32-34页 |
| ·扩大培养 | 第32页 |
| ·诱导收菌破碎 | 第32-33页 |
| ·Ni-NTA亲和柱纯化HMCES蛋白 | 第33页 |
| ·HMCES蛋白浓缩 | 第33页 |
| ·HMCES蛋白的Superdcx 200分子筛纯化 | 第33-34页 |
| ·HMCES蛋白稳定降解片段的确定 | 第34页 |
| ·质谱分析 | 第34页 |
| ·二级结构预测 | 第34页 |
| ·同源蛋白结构分析 | 第34页 |
| ·HMCES-276蛋白纯化 | 第34-35页 |
| ·HMCES-276的克隆 | 第34-35页 |
| ·HMCES-276的表达 | 第35页 |
| ·HMCES-276的纯化 | 第35页 |
| ·HMCES-276的纯化优化 | 第35页 |
| ·HMCES-276蛋白的晶体初筛 | 第35-36页 |
| ·HMCES-276晶体初筛 | 第35页 |
| ·HMCES-276晶体的捞取 | 第35-36页 |
| ·分子排阻层析实验 | 第36-38页 |
| 第三章 实验结果与讨论 | 第38-49页 |
| ·HMCES基因的克隆及质粒构建 | 第38-40页 |
| ·HMCES及HMCES-MBP蛋白的表达鉴定 | 第40页 |
| ·HMCES-MBP蛋白纯化 | 第40-42页 |
| ·HMCES-MBP蛋白的Ni-NTA亲和柱纯化 | 第40-41页 |
| ·TEV酶酶切HMCES-MBP | 第41-42页 |
| ·HMCES蛋白纯化 | 第42-43页 |
| ·HMCES蛋白的Ni-NTA亲和柱纯化 | 第42-43页 |
| ·HMCES蛋白的Superdex 200分子筛纯化 | 第43页 |
| ·HMCES蛋白稳定降解片段的确定 | 第43-46页 |
| ·HMCES-276蛋白的纯化 | 第46-48页 |
| ·HMCES-276蛋白的Ni-NTA亲和柱纯化 | 第46页 |
| ·HMCES-276的Superdex 200分子筛纯化 | 第46-48页 |
| ·HMCES-276蛋白的晶体初筛 | 第48-49页 |
| 本篇小结 | 第49-50页 |
| 参考文献 | 第50-52页 |
| 第二篇 的大肠杆菌单链DNA结合蛋白RecT的初步纯化 | 第52-76页 |
| 第一章 研究背景概述 | 第52-58页 |
| ·DNA损伤修复简介 | 第52页 |
| ·DNA重组修复简介 | 第52-56页 |
| ·RecA | 第53页 |
| ·RecBCD | 第53-54页 |
| ·RecFOR | 第54-55页 |
| ·RecET | 第55-56页 |
| ·本篇拟解决的问题 | 第56-58页 |
| 第二章 实验材料与方法 | 第58-66页 |
| ·材料 | 第58页 |
| ·仪器设备 | 第58页 |
| ·方法 | 第58-66页 |
| ·基因克隆和载体构建 | 第58-61页 |
| ·引物设计 | 第58-60页 |
| ·PCR扩增 | 第60-61页 |
| ·目的基因片段鉴定回收,双酶切及连接载体 | 第61页 |
| ·RecT及RecT-MBP蛋白的表达鉴定 | 第61页 |
| ·转化Rosetta菌株 | 第61页 |
| ·挑单克隆 | 第61页 |
| ·保菌、取样、诱导和鉴定表达 | 第61页 |
| ·RecT-MBP蛋白的初步纯化 | 第61-63页 |
| ·扩大培养 | 第62页 |
| ·诱导收菌破碎 | 第62页 |
| ·Ni-NTA亲和柱纯化RecT-MBP蛋白 | 第62页 |
| ·TEV酶酶切除MBP助溶标签 | 第62-63页 |
| ·RecT-MBP蛋白的进一步纯化 | 第63页 |
| ·确定分离MBP的方法 | 第63页 |
| ·QFF阴离子交换柱纯化 | 第63页 |
| ·Superdex 200分子筛纯化 | 第63页 |
| ·RecT的晶体初筛 | 第63-64页 |
| ·RecT结晶优化 | 第64页 |
| ·确定RecT蛋白的截短片段 | 第64页 |
| ·RecT截短片段的纯化 | 第64-65页 |
| ·RecT截短片段的克隆 | 第64页 |
| ·RecT截短片段的表达 | 第64页 |
| ·RecT-C的纯化 | 第64-65页 |
| ·RecT-C的晶体初筛 | 第65-66页 |
| 第三章 实验结果与讨论 | 第66-73页 |
| ·RecT基因的克隆及质粒构建 | 第66页 |
| ·RecT及RecT-MBP蛋白的表达鉴定 | 第66-67页 |
| ·RecT-MBP蛋白的初步纯化 | 第67页 |
| ·RecT-MBP蛋白的进一步纯化 | 第67-70页 |
| ·确定分离MBP的方法 | 第67-68页 |
| ·QFF阴离子交换柱纯化 | 第68-70页 |
| ·Superdex 200分子筛纯化 | 第70页 |
| ·RecT的晶体初筛 | 第70-71页 |
| ·RecT结晶优化 | 第71页 |
| ·确定RecT蛋白的截短片段 | 第71-72页 |
| ·RecT截短片段的纯化 | 第72页 |
| ·RecT-C的晶体初筛 | 第72-73页 |
| 本篇小结 | 第73-74页 |
| 参考文献 | 第74-76页 |
| 附录 | 第76-82页 |
| 附录1：实验室使用的未改造载体pET28a图谱及多克隆位点 | 第76-79页 |
| 实验室使用的改造载体pET28a图谱及多克隆位点 | 第77-78页 |
| 实验室普遍使用的未改造载体pET22b图谱及多克隆位点 | 第78-79页 |
| 附录2 酶切位点选择 | 第79-80页 |
| 附录3：实验过程使用的缓冲液配方 | 第80-81页 |
| 附录4：分子排阻层析实验过程 | 第81-82页 |
| 致谢 | 第82-83页 |
