| 摘要 | 第1-5页 |
| ABSTRACT | 第5-10页 |
| 1 前言 | 第10-19页 |
| ·纤维素酶 | 第10-11页 |
| ·纤维素酶的简介 | 第10页 |
| ·纤维素酶的作用机制 | 第10-11页 |
| ·粗糙脉孢菌 | 第11-13页 |
| ·粗糙脉孢菌简介 | 第11-12页 |
| ·ncw1简介 | 第12-13页 |
| ·丝状真菌信号传导途径和表达系统 | 第13-14页 |
| ·丝状真菌纤维素酶诱导表达过程中的信号传导途径 | 第13-14页 |
| ·丝状真菌表达系统简介 | 第14页 |
| ·里氏木霉 | 第14-17页 |
| ·里氏木霉的简介 | 第14页 |
| ·里氏木霉遗传转化研究进展 | 第14-16页 |
| ·RL-P37 | 第16-17页 |
| ·研究目的和意义 | 第17-18页 |
| ·主要研究内容 | 第18-19页 |
| 2 材料与方法 | 第19-42页 |
| ·实验仪器和生化试剂 | 第19-22页 |
| ·实验仪器 | 第19-20页 |
| ·主要实验试剂 | 第20-22页 |
| ·实验用菌株、质粒和引物 | 第22-25页 |
| ·菌株 | 第22页 |
| ·质粒 | 第22-23页 |
| ·引物序列 | 第23-25页 |
| ·培养基和缓冲液 | 第25-28页 |
| ·培养基 | 第25-26页 |
| ·常用溶液和缓冲液 | 第26-28页 |
| ·主要实验方法 | 第28-42页 |
| ·PCR扩增 | 第28页 |
| ·目的片段的获得 | 第28-29页 |
| ·质粒DNA抽提 | 第29-30页 |
| ·酶切和连接 | 第30页 |
| ·大肠杆菌的转化 | 第30页 |
| ·N.crassa菌株的活化、培养与保藏 | 第30-31页 |
| ·N.crassa分生孢子基因组DNA的提取 | 第31页 |
| ·N.crassa多突变体的构建 | 第31-32页 |
| ·ncw1回补和过表达载体的构建 | 第32-33页 |
| ·N.crassa的电转化 | 第33-34页 |
| ·蛋白浓度的测定 | 第34页 |
| ·酶活和还原糖测定 | 第34-36页 |
| ·发酵液粘度的测定 | 第36页 |
| ·菌丝干重的测定 | 第36页 |
| ·丝状真菌RNA提取和纯化 | 第36-37页 |
| ·RT-qPCR | 第37-38页 |
| ·SDS-PAGE预制胶电泳 | 第38-39页 |
| ·里氏木霉的培养和基因组提取 | 第39页 |
| ·里氏木霉原生质体的制备和转化 | 第39-40页 |
| ·Southern杂交 | 第40-42页 |
| 3 结果与讨论 | 第42-64页 |
| ·粗糙脉孢菌ncw1在纤维素酶表达分泌过程中的分子功能研究 | 第42-58页 |
| ·Δncw1突变体生长实验 | 第42-43页 |
| ·Δncw1突变体摇瓶实验 | 第43-44页 |
| ·Δncw1突变体诱导实验 | 第44-45页 |
| ·Δncw1突变体的回补和过表达 | 第45-51页 |
| ·Δncw1突变体的扫描电镜实验 | 第51页 |
| ·Δncw1突变体的RT-qPCR实验 | 第51-52页 |
| ·Δncw1Δcrel双突变体的构建 | 第52-54页 |
| ·Δncw1Δ3βG四突变体的构建 | 第54-57页 |
| ·小结 | 第57-58页 |
| ·里氏木霉RL-P37尿嘧啶营养缺陷型菌株的构建 | 第58-64页 |
| ·RL-P37 pyr4基因敲除实验设计 | 第58页 |
| ·敲除盒及回补质粒的构建 | 第58-59页 |
| ·里氏木霉RL-P37pyr4基因的敲除 | 第59-60页 |
| ·转化子的初筛 | 第60页 |
| ·Southern杂交验证RL-P37Δpyr4突变体 | 第60-61页 |
| ·RL-P37Δpyr4突变体的回补 | 第61-62页 |
| ·RL-P37Δpyr4突变体产酶分析 | 第62-63页 |
| ·小结 | 第63-64页 |
| 4 结论 | 第64-65页 |
| 5 展望 | 第65-66页 |
| 6 参考文献 | 第66-72页 |
| 7 论文发表情况 | 第72-73页 |
| 8 致谢 | 第73页 |