摘要 | 第1-9页 |
ABSTRACT | 第9-10页 |
第一章 文献综述 | 第10-35页 |
1 植物先天免疫机制研究进展 | 第10-15页 |
·MAMPs/PAMPs 基本原理 | 第10页 |
·PAMPs 与模式受体( PRRs )的胞外识别 | 第10-13页 |
·鞭毛蛋白 flg22 与受体 FLS2 | 第11页 |
·延伸因子 elf18 /elf26 与受体 EFR | 第11-12页 |
·其他 PAMPs 和 PRRs 受体蛋白 | 第12页 |
·DAMPs 和 DAMP receptor | 第12-13页 |
·效应分子( Effectors )的胞内识别 | 第13-14页 |
·直接和间接识别效应分子 | 第13-14页 |
·NB-LRR 类蛋白的激活 | 第14页 |
·PTI 和 ETI 的胞内信号途径 | 第14-15页 |
·PTI 的激酶信号途径 | 第15页 |
·ETI 的信号转导途径 | 第15页 |
2 活性氧在植物抗病性中的作用 | 第15-18页 |
·活性氧作为拮抗微生物因子 | 第16页 |
·活性氧参与植物过敏性坏死反应 | 第16-17页 |
·活性氧参与植物细胞壁氧化交联反应 | 第17页 |
·活性氧参与植物信号转导和基因表达 | 第17-18页 |
·活性氧与 Ca2+信号通道 | 第17-18页 |
·活性氧与 MAPK 信号转导通路 | 第18页 |
3 木霉菌对植物诱导抗性的研究进展 | 第18-21页 |
·不同木霉菌种诱导植物抗性 | 第18-19页 |
·木霉菌产生激发子诱导植物抗性 | 第19-20页 |
·具酶活性的或其他功能的蛋白质 | 第19-20页 |
·Avr 同源物 | 第20页 |
·低聚糖及低分子量化合物 | 第20页 |
·木霉菌与植物互作 | 第20-21页 |
·木霉菌植物共生体 | 第20页 |
·木霉菌对植物代谢及根系定殖的影响 | 第20-21页 |
4 木霉菌生物组学研究进展 | 第21-24页 |
·木霉菌基因组(THE TRICHODERMA GENOME) | 第21-22页 |
·木霉菌转录组(THE TRICHODERMA TRANSCRIPTOME) | 第22-23页 |
·木霉菌蛋白组 (THE TRICHODERMA PROTEOME) | 第23页 |
·木霉菌代谢组 (THE TRICHODERMA METABOLOME) | 第23-24页 |
5 科学问题的提出 | 第24-25页 |
参考文献 | 第25-35页 |
第二章 绿木霉 Sm1 基因的克隆 | 第35-46页 |
1 材料与方法 | 第35-40页 |
·材料 | 第35-36页 |
·菌株与质粒 | 第35页 |
·培养基与抗生素 | 第35页 |
·主要酶与生化试剂 | 第35-36页 |
·主要仪器设备 | 第36页 |
·方法 | 第36-40页 |
·绿木霉 YZ2612 基因组 DNA 的提取 | 第36-37页 |
·绿木霉 YZ2612 RNA 的提取及 cDNA 第一链合成 | 第37页 |
·Sm1 基因同源克隆的引物设计 | 第37-38页 |
·Sm1 基因同源片段的 PCR 扩增 | 第38页 |
·Sm1 基因同源片段的纯化及 TA 克隆 | 第38页 |
·大肠杆菌感受态的制备 | 第38-39页 |
·大肠杆菌感受态转化 | 第39页 |
·Sm1 基因同源片段的生物信息学分析 | 第39页 |
·Sm1 基因的拷贝数分析 | 第39-40页 |
2 结果与分析 | 第40-43页 |
·Sm1 基因的同源条带扩增 | 第40页 |
·Sm1 基因序列 | 第40页 |
·序列的生物信息学比对 | 第40-43页 |
·Sm1 基因的拷贝数 | 第43页 |
3 讨论 | 第43-45页 |
参考文献 | 第45-46页 |
第三章 绿木霉菌 Sm1 的原核表达及蛋白纯化 | 第46-57页 |
1 材料与方法 | 第46-50页 |
·材料 | 第46-47页 |
·菌株与质粒 | 第46页 |
·培养基与抗生素 | 第46页 |
·主要酶与生化试剂 | 第46-47页 |
·主要仪器设备 | 第47页 |
·方法 | 第47-50页 |
·引物设计 | 第47页 |
·原核表达载体 pET28a(+)Sm1 的构建 | 第47-48页 |
·融合表达载体 pET28a(+)Sm1 的诱导表达及条件优化 | 第48页 |
·目的蛋白的可溶性分析 | 第48页 |
·目的蛋白的复性纯化 | 第48-49页 |
·目的蛋白浓度的测定(Bradford 法) | 第49页 |
·表达蛋白的 Western Blotting 分析 | 第49-50页 |
2 结果与分析 | 第50-54页 |
·融合表达载体 pET28a(+)Sm1 的构建与 PCR 鉴定 | 第50页 |
·融合表达载体 pET28a(+)Sm1 的诱导表达和 SDSPAGE 电泳分析 | 第50-52页 |
·重组细胞 IPTG 诱导浓度及表达时间的优化 | 第50-51页 |
·重组细胞诱导表达温度的优化 | 第51-52页 |
·目的蛋白可溶性分析及 Western Blotting | 第52-53页 |
·目的蛋白的复性纯化 | 第53-54页 |
3 讨论 | 第54-56页 |
参考文献 | 第56-57页 |
第四章 Sm1 蛋白对拟南芥生长和抗细菌性叶斑病的影响 | 第57-65页 |
1 材料与方法 | 第57-59页 |
·材料 | 第57-58页 |
·菌株与植物材料 | 第57页 |
·培养基与抗生素 | 第57页 |
·主要酶与生化试剂 | 第57-58页 |
·主要仪器设备 | 第58页 |
·方法 | 第58-59页 |
·拟南芥的生长培养 | 第58页 |
·Sm1 蛋白液处理拟南芥幼苗和叶片 | 第58页 |
·病原菌的挑战接种 | 第58-59页 |
·引物设计及 RTPCR 分析 | 第59页 |
2 结果与分析 | 第59-62页 |
·Sm1 蛋白液对拟南芥幼苗生长的影响 | 第59-60页 |
·拟南芥叶片对 Sm1 蛋白处理的反应 | 第60-61页 |
·挑战接种条件下拟南芥叶片对 Sm1 蛋白处理的反应 | 第61-62页 |
3 讨论 | 第62-63页 |
参考文献 | 第63-65页 |
第五章 Sm1 蛋白诱导植物活性氧代谢相关基因的表达分析 | 第65-74页 |
1 材料与方法 | 第65-68页 |
·材料 | 第65-66页 |
·质粒、菌株与植物材料 | 第65页 |
·培养基与抗生素 | 第65页 |
·主要酶与生化试剂 | 第65-66页 |
·主要仪器设备 | 第66页 |
·方法 | 第66-68页 |
·拟南芥的生长培养 | 第66页 |
·玉米幼苗的培养 | 第66页 |
·Sm1 蛋白液处理拟南芥幼苗和叶片 | 第66页 |
·Sm1 蛋白液处理玉米幼苗并挑战接种玉米弯孢霉叶斑病菌 | 第66页 |
·引物设计及 RTPCR 分析 | 第66-67页 |
·瞬时表达载体的构建及转化表达 | 第67-68页 |
·活性氧的检测 | 第68页 |
2 结果与分析 | 第68-71页 |
·Sm1 蛋白液诱导拟南芥幼苗活性氧代谢相关基因的表达 | 第68页 |
·Sm1 蛋白液诱导玉米对弯孢霉叶斑病菌的抗性反应 | 第68-69页 |
·Sm1 蛋白液触发拟南芥和玉米叶片活性氧的爆发 | 第69页 |
·Sm1 基因亚定位于洋葱表皮细胞的细胞核 | 第69-71页 |
3 讨论 | 第71-73页 |
参考文献 | 第73-74页 |
第六章 全文总结与展望 | 第74-76页 |
致谢 | 第76-77页 |
硕士期间文章发表情况 | 第77页 |
会议报告 | 第77-79页 |