| 摘要 | 第1-5页 |
| ABSTRACT | 第5-12页 |
| 缩略语表 | 第12-15页 |
| 第一章 绪论 | 第15-38页 |
| ·细菌天然产物的研究进展 | 第15-16页 |
| ·天然产物的化学合成 | 第16页 |
| ·天然产物的生物合成 | 第16-24页 |
| ·聚酮合酶 | 第17-20页 |
| ·聚肽合成酶 | 第20-22页 |
| ·聚酮-聚肽杂合化合物生物合成机制 | 第22页 |
| ·特殊聚酮和聚肽类化合物的生物合成机制 | 第22-24页 |
| ·生物合成基因簇的直接克隆 | 第24-37页 |
| ·Red/ET重组技术的诞生 | 第24-27页 |
| ·Red/ET重组的工作原理 | 第27-30页 |
| ·Red/ET重组技术中各元件的功能 | 第30-34页 |
| ·Red/ET重组系统的选择 | 第34页 |
| ·细菌基因簇的直接克隆 | 第34-37页 |
| ·立题依据和意义 | 第37-38页 |
| 第二章 荧光假单胞菌rhizoxin基因簇的直接克隆和异源表达 | 第38-83页 |
| ·前言 | 第38-41页 |
| ·材料和方法 | 第41-53页 |
| ·实验材料 | 第41-47页 |
| ·实验方法 | 第47-53页 |
| ·结果与分析 | 第53-80页 |
| ·Rhizoxin基因簇的直接克隆 | 第53-57页 |
| ·三重重组技术构建BAC载体 | 第57-58页 |
| ·Red/ET重组技术将rhizoxin上游片段插入BAC载体 | 第58-59页 |
| ·构建包含完整rhizoxin基因簇的BAC载体 | 第59-60页 |
| ·包含完整rhizoxin基因簇BAC载体的后修饰 | 第60-66页 |
| ·Rhizoxin基因簇整合至恶臭假单胞菌基因组 | 第66页 |
| ·Rhizoxin基因簇整合至荚壳伯克氏菌基因组 | 第66页 |
| ·Rhizoxin基因簇的异源表达分析 | 第66-78页 |
| ·Rhizoxin衍生化合物的分离、纯化及NMR鉴定 | 第78页 |
| ·Rhizoxin Z2化合物标准曲线的制备 | 第78-79页 |
| ·不同宿主异源表达Rhizoxin衍生化合物的定量分析 | 第79页 |
| ·发酵温度对rhizoxin衍生化合物产量的影响 | 第79页 |
| ·发酵时间对rhizoxin衍生化合物产量的影响 | 第79-80页 |
| ·异源宿主的分泌功能对rhizoxin衍生化合物产量的影响 | 第80页 |
| ·讨论 | 第80-83页 |
| ·直接克隆的影响因素 | 第80-81页 |
| ·异源表达宿主选择的影响因素 | 第81-82页 |
| ·恶臭假单胞菌作为异源表达宿主的优越性 | 第82-83页 |
| 第三章 粘细菌tubulysin基因簇的修饰和异源表达 | 第83-107页 |
| ·前言 | 第83-87页 |
| ·材料和方法 | 第87-93页 |
| ·实验材料 | 第87-91页 |
| ·实验方法 | 第91-93页 |
| ·结果与分析 | 第93-104页 |
| ·tubC基因的起始密码子由ATG变为TTG | 第93-96页 |
| ·p450基因633P1引入tubulysin表达载体pTub-ATG | 第96-100页 |
| ·Tubulysin基因簇整合至恶臭假单胞菌基因组 | 第100-102页 |
| ·基因簇tubulysin的异源表达分析 | 第102-104页 |
| ·发酵温度对tubulysin化合物产量的影响 | 第104页 |
| ·D型2-哌啶酸对tubulysin化合物生物合成的影响 | 第104页 |
| ·讨论 | 第104-107页 |
| ·建立tubulysin异源表达体系的必要性 | 第104-105页 |
| ·Tubulysin生物合成基因簇的异源表达分析 | 第105-107页 |
| 第四章 苏云金芽胞杆菌杀虫蛋白Cry1Ac的直接进化研究 | 第107-128页 |
| ·前言 | 第107-111页 |
| ·材料和方法 | 第111-120页 |
| ·材料 | 第111-115页 |
| ·实验方法 | 第115-120页 |
| ·结果与分析 | 第120-125页 |
| ·毒素基因表达载体的构建 | 第120-121页 |
| ·利用直接进化及Red/ET重组技术构建突变文库 | 第121-123页 |
| ·毒素基因在无晶体突变株Cry-B中的表达 | 第123页 |
| ·改组基因cry1Ac的序列分析 | 第123-124页 |
| ·突变前后晶体的显微镜观察和形态比较 | 第124-125页 |
| ·突变前后晶体的杀虫活性比较分析 | 第125页 |
| ·突变前后生物信息学的比较分析 | 第125页 |
| ·讨论 | 第125-128页 |
| 第五章 研究结论与展望 | 第128-130页 |
| ·主要研究结论 | 第128页 |
| ·下一步研究设想 | 第128-130页 |
| 参考文献 | 第130-145页 |
| 论文发表情况 | 第145-147页 |
| 致谢 | 第147-148页 |
| 本论文感谢以下基金项目的资助 | 第148-149页 |
