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人参2,3-氧化角鲨烯代谢途径中关键酶的表达调控研究

摘要第1-6页
Abstract第6-8页
目录第8-13页
第1章 绪论第13-25页
   ·选题的目的和意义第13-15页
     ·选题的目的第13-15页
     ·选题的意义第15页
   ·国内外研究现状第15-22页
     ·人参及其功能概述第15-16页
     ·人参皂苷的研究现状第16-22页
   ·研究内容及技术路线第22-25页
     ·主要研究内容第22-23页
     ·技术路线第23-25页
第2章 人参发根的诱导和继代培养体系的建立第25-35页
   ·引言第25页
   ·试验材料及溶液配制第25-28页
     ·试验材料和试剂第25页
     ·试验试剂第25-28页
   ·试验方法第28-29页
     ·发根农杆菌 A4 的活化第28页
     ·人参发根的诱导第28页
     ·人参发根继代培养体系的优化第28-29页
   ·结果和分析第29-33页
     ·人参发根的诱导第29页
     ·人参发根继代培养体系的优化第29-33页
   ·讨论第33-34页
   ·小结第34-35页
第3章 人参 LAS、DS 和 CAS 基因核心片段的克隆第35-49页
   ·引言第35页
   ·试验材料与试剂配制第35-36页
     ·试验材料与试剂第35页
     ·试验试剂配制第35-36页
   ·试验方法第36-41页
     ·人参发根总 RNA 的提取及 cDNA 第一条链的合成第36-39页
     ·人参发根 LAS 基因同源编码区核心片段的克隆第39页
     ·人参发根 DS 基因同源编码区核心片段的克隆第39-40页
     ·人参发根 CAS 基因同源编码区核心片段的克隆第40-41页
   ·结果与分析第41-47页
     ·人参发根总 RNA 的提取第41-42页
     ·人参发根 LAS 基因核心片段的克隆第42-44页
     ·人参发根 DS 基因核心片段的克隆第44-45页
     ·人参发根 CAS 基因核心片段的克隆第45-47页
   ·讨论第47页
   ·小结第47-49页
第4章 人参关键酶基因 RNAI 元件的合成及干扰载体的构建第49-73页
   ·引言第49页
   ·试验材料及试剂配制第49-51页
     ·试验材料第49-50页
     ·试验配制第50-51页
   ·试验方法第51-61页
     ·人参发根 LAS 基因 RNA 干扰元件的构建第51-54页
     ·人参发根 DS 基因 RNA 干扰元件的构建第54-56页
     ·人参发根 CAS 基因 RNA 干扰元件的构建第56-58页
     ·RNA 干扰载体的构建第58-61页
   ·结果与分析第61-70页
     ·人参发根 LAS 基因 RNA 干扰元件的构建第61-64页
     ·人参发根 DS 基因 RNA 干扰元件的构建第64-66页
     ·人参发根 CAS 基因 RNA 干扰元件的构建第66-68页
     ·构建 RNA 干扰载体及 Hind III-ClaⅠ双酶切鉴定第68-70页
     ·讨论第70-72页
   ·小结第72-73页
第5章 人参 RNAI 载体的遗传转化鉴定分析第73-91页
   ·引言第73页
   ·试验材料及试剂配制第73-74页
     ·试验材料第73页
     ·试剂配制第73-74页
   ·试验方法第74-81页
     ·菌种的活化第74页
     ·感受态发根农杆菌 A4 制备第74-75页
     ·重组质粒的发根农杆菌 A4 转化第75页
     ·发根农杆菌 A4 阳性克隆的鉴定第75-78页
     ·转化用发根农杆菌 A4 菌液的制备第78页
     ·RNA 干扰的人参发根诱导第78-79页
     ·转化后人参发根的 RT-PCR 鉴定分析第79-81页
   ·结果与分析第81-89页
     ·阳性 RNAi 表达载体工程菌的鉴定第81-85页
     ·RNA 干扰人参发根体系的建立第85-87页
       ·RNAi 转化人参发根的 RT-PCR 鉴定分析第87-89页
   ·讨论第89-90页
   ·小结第90-91页
第6章 2,3-氧化角鲨烯代谢途径中关键酶的功能分析与表达调控鉴定第91-121页
   ·引言第91页
   ·试验材料及试剂第91-92页
     ·试验材料第91页
     ·试验试剂配制第91-92页
   ·试验方法第92-99页
     ·RNAi 人参发根生长的测定第92页
       ·RNAi 人参发根总皂苷含量的检测第92-93页
     ·RNAi 人参发根总甾醇含量的检测第93-94页
     ·RNAi 人参发根单体皂苷(Rg1、Re、Rb1)的含量测定第94-95页
     ·RNAi 人参发根中羊毛甾醇的含量测定第95-96页
     ·RNAi 人参发根中达玛烯二醇的含量测定第96-98页
     ·RNAi 人参发根中环阿乔醇的含量测定第98-99页
   ·试验结果第99-117页
     ·RNAi 对人参发根生长的影响第99-100页
     ·RNAi 干扰对人参发根总皂苷含量的影响第100-102页
     ·RNAi 对人参发根总甾醇含量的影响第102-103页
     ·RNAi 对人参单体皂苷(Rg1、Re、Rb1)含量的影响第103-109页
     ·RNA 干扰对人参发根中羊毛甾醇含量的影响第109-111页
     ·RNA 干扰对人参发根中达玛烯二醇含量的影响第111-114页
     ·RNA 干扰对人参发根中环阿乔醇含量的影响第114-117页
   ·讨论第117-118页
   ·小结第118-121页
第7章 结论与展望第121-125页
   ·结论第121-122页
   ·创新点第122页
   ·展望第122-125页
参考文献第125-136页
英文缩写第136-137页
科研成果第137-139页
致谢第139页

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