| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-9页 |
| 第一章 绪论 | 第9-16页 |
| ·BTD 的结构与变构性质 | 第9-12页 |
| ·BTD2 的结构与变构性质 | 第9-11页 |
| ·BTD1 的结构与变构性质 | 第11-12页 |
| ·类 ACT 亚结构域 | 第12页 |
| ·CTD 的结构与性质 | 第12页 |
| ·酶的进化途径 | 第12-14页 |
| ·基因复制 | 第13页 |
| ·基因延伸 | 第13-14页 |
| ·基因融合 | 第14页 |
| ·TD 的应用 | 第14-15页 |
| ·立题背景及意义 | 第15页 |
| ·课题的主要研究内容 | 第15-16页 |
| 第二章 材料与方法 | 第16-23页 |
| ·CTD 与 BTD 序列特征及结构特征的比对 | 第16页 |
| ·CTD 与 BTD 的序列特征比对 | 第16页 |
| ·CTD 与 BTD 的结构特征比对 | 第16页 |
| ·TD 蛋白质序列进化树模型及菌种 16s rDNA 序列进化树模型的构建 | 第16-17页 |
| ·用于进化树模型构建的菌种选定 | 第16-17页 |
| ·TD 蛋白质序列进化树模型的构建 | 第17页 |
| ·16s rDNA 序列进化树模型的构建 | 第17页 |
| ·分子操作的实验材料及仪器设备 | 第17-20页 |
| ·菌株、质粒、引物和培养条件 | 第17-19页 |
| ·主要试剂 | 第19-20页 |
| ·主要仪器设备 | 第20页 |
| ·分子生物学的相关操作 | 第20-21页 |
| ·基因组 DNA 及质粒 DNA 的提取 | 第20-21页 |
| ·PCR 反应 | 第21页 |
| ·质粒和 DNA 片段的酶切连接 | 第21页 |
| ·TD 的表达与纯化 | 第21-22页 |
| ·TD 的表达 | 第21页 |
| ·TD 的纯化 | 第21-22页 |
| ·TD 酶学性质的测定 | 第22-23页 |
| ·酶活力的测定方法 | 第22页 |
| ·酶热力学稳定性的测定方法 | 第22页 |
| ·TD 在不同浓度异亮氨酸环境下的酶活力测定方法 | 第22-23页 |
| 第三章 结果与讨论 | 第23-43页 |
| ·CTD 与 BTD 为来源相同祖先的同源蛋白质 | 第23-25页 |
| ·CTD 与 BTD 的序列特征一致 | 第23-24页 |
| ·CTD 与 BTD 的结构特征一致 | 第24-25页 |
| ·TD 进化过程中经历基因融合、复制、延伸和丢失 | 第25-34页 |
| ·TD 进化过程中经历基因融合和基因复制 | 第26-31页 |
| ·TD 进化过程中经历基因延伸和基因丢失 | 第31-34页 |
| ·酶的稳定性及易变性可能推动 TD 进化 | 第34-38页 |
| ·TD 重组表达菌株的构建 | 第34-35页 |
| ·TD 的表达与纯化 | 第35-36页 |
| ·酶的稳定性及易变性可能推动 TD 进化 | 第36-38页 |
| ·TD 的进化模型 | 第38-39页 |
| ·类 ACT 亚结构域的去除可解除异亮氨酸对 BTD 的反馈抑制 | 第39-43页 |
| ·EcBTD2M和 CgBTD1M表达载体的构建 | 第39-40页 |
| ·EcBTD2M及 CgBTD1M的表达与纯化 | 第40-41页 |
| ·类 ACT 亚结构域的去除可解除异亮氨酸对 BTD 的反馈抑制 | 第41-43页 |
| 主要结论与展望 | 第43-45页 |
| 致谢 | 第45-46页 |
| 参考文献 | 第46-51页 |
| 附录 1 用于 TD 蛋白质序列进化树模型构建的代表菌株及 TD | 第51-56页 |
| 附录 2 作者在攻读硕士学位期间发表的论文 | 第56页 |
