| 摘要 | 第1-10页 |
| ABSTRACT | 第10-12页 |
| 缩略语表 | 第12-13页 |
| 1 前言 | 第13-23页 |
| ·脂肪酶概述 | 第13-14页 |
| ·脂肪酶的来源 | 第14页 |
| ·脂肪酶的应用 | 第14-16页 |
| ·生物柴油合成 | 第14-15页 |
| ·农业生产 | 第15页 |
| ·化妆品以及香料 | 第15页 |
| ·医学治疗 | 第15页 |
| ·洗涤剂 | 第15页 |
| ·食品工业 | 第15-16页 |
| ·酶活力测定方法 | 第16-17页 |
| ·定性检测 | 第16页 |
| ·定量检测 | 第16-17页 |
| ·冷活性酶的研究 | 第17-19页 |
| ·嗜冷酶 | 第17-18页 |
| ·Alcanivorax sp.的研究背景 | 第18页 |
| ·研究目的及意义 | 第18-19页 |
| ·技术路线 | 第19页 |
| ·热稳定性酶的研究 | 第19-23页 |
| ·理性设计与定点突变 | 第19-20页 |
| ·Aspergillus fumigatus的研究背景 | 第20-21页 |
| ·研究目的及意义 | 第21-22页 |
| ·技术路线 | 第22-23页 |
| 2 材料和方法 | 第23-43页 |
| ·材料 | 第23-26页 |
| ·菌株与质粒 | 第23页 |
| ·试剂 | 第23页 |
| ·培养基 | 第23-24页 |
| ·溶液 | 第24-25页 |
| ·仪器设备 | 第25-26页 |
| ·酯酶基因estB的克隆与重组 | 第26-29页 |
| ·食烷菌基因组DNA的提取 | 第26页 |
| ·退火温度摸索以及estB基因的扩增 | 第26-27页 |
| ·PCR产物回收、酶连 | 第27-28页 |
| ·大肠杆菌感受态制备以及电转化 | 第28-29页 |
| ·碱裂解法抽取质粒DNA | 第29页 |
| ·酯酶EstB的表达与纯化 | 第29-32页 |
| ·酯酶EstB的诱导表达与纯化 | 第29-30页 |
| ·SDS-PAGE | 第30-31页 |
| ·蛋白质浓度测定 | 第31-32页 |
| ·酯酶EstB酶学性质研究 | 第32-33页 |
| ·酯酶酶活性测定方法 | 第32页 |
| ·标准曲线绘制 | 第32页 |
| ·底物特异性 | 第32页 |
| ·最适温度和热失活分析 | 第32-33页 |
| ·最适pH | 第33页 |
| ·有机溶剂、去污剂对酯酶活性的影响 | 第33页 |
| ·金属离子及其他化学物质对酯酶活性的影响 | 第33页 |
| ·酯酶动力学研究 | 第33页 |
| ·重组pGEX-6p-estQ的构建 | 第33-35页 |
| ·estQ基因的扩增 | 第33-34页 |
| ·PCR产物回收、酶连以及转化 | 第34-35页 |
| ·EstQ突变体的构建 | 第35-41页 |
| ·突变设计与定点突变 | 第35-38页 |
| ·突变体的构建 | 第38-39页 |
| ·野生型与突变体蛋白表达与纯化 | 第39-40页 |
| ·SDS-PAGE与蛋白质浓度测定 | 第40-41页 |
| ·酶学性质研究 | 第41-43页 |
| ·酶活性测定标准方法 | 第41页 |
| ·最适温度与热稳定性 | 第41页 |
| ·最适pH与pH稳定性 | 第41-42页 |
| ·热失活性研究 | 第42-43页 |
| ·动力学常数测定 | 第43页 |
| ·三维结构模拟 | 第43页 |
| 3 结果与分析 | 第43-66页 |
| ·EstB酶学性质研究 | 第43-54页 |
| ·基因组DNA的提取 | 第43页 |
| ·PCR退火温度摸索以及扩增结果 | 第43-45页 |
| ·重组质粒pGEX-6p-1-estB的构建 | 第45页 |
| ·EstB序列分析 | 第45-48页 |
| ·蛋白质浓度测定 | 第48页 |
| ·酯酶活性测定标准曲线 | 第48页 |
| ·底物特异性 | 第48-49页 |
| ·最适温度和热失活 | 第49-50页 |
| ·最适pH | 第50页 |
| ·有机溶剂以及去污剂对EstB活性的影响 | 第50-51页 |
| ·金属离子以及其它化合物对EstB活性的影响 | 第51-52页 |
| ·动力学常数测定 | 第52-53页 |
| ·冷活性比较与分析 | 第53-54页 |
| ·酯酶EstQ定点突变 | 第54-66页 |
| ·重组质粒pGEX-6p-1-estQ的构建 | 第54-56页 |
| ·EstQ序列分析 | 第56-57页 |
| ·突变体的构建 | 第57-59页 |
| ·蛋白浓度测定 | 第59页 |
| ·最适温度与热稳定性 | 第59-60页 |
| ·最适pH与pH稳定性 | 第60-61页 |
| ·热失活研究 | 第61-62页 |
| ·动力学常数测定 | 第62-63页 |
| ·3D结构模拟 | 第63-66页 |
| 4 讨论 | 第66-70页 |
| ·酯酶EstB酶学性质研究 | 第66-67页 |
| ·酯酶EstQ定点突变 | 第67-70页 |
| 参考文献 | 第70-76页 |
| 附录 | 第76-79页 |
| 致谢 | 第79页 |