| 摘要 | 第1-10页 |
| Abstract | 第10-12页 |
| 缩略语表 | 第12-13页 |
| 第一章 文献综述 | 第13-24页 |
| ·日本乙型脑炎的流行病学 | 第13-15页 |
| ·日本乙型脑炎病毒的分子生物学研究 | 第15-17页 |
| ·黄病毒NS2B/NS3蛋白酶的功能研究 | 第17-18页 |
| ·黄病毒NS2B/NS3蛋白酶复合物的晶体结构研究 | 第18-19页 |
| ·NS2B/NS3蛋白酶抑制剂的研究进展 | 第19-22页 |
| ·药物高通量筛选的研究和分子碎片药物的设计 | 第22-24页 |
| ·药物高通量筛选的研究 | 第22-23页 |
| ·分子碎片药物设计 | 第23-24页 |
| 第二章 研究目的与意义 | 第24-25页 |
| 第三章 JEV NS3蛋白酶抑制剂的高通量筛选 | 第25-53页 |
| ·实验材料 | 第25-28页 |
| ·质粒和菌株 | 第25页 |
| ·荧光底物的设计 | 第25页 |
| ·相关试剂和药品 | 第25-26页 |
| ·抗生素和培养基的配制 | 第26页 |
| ·缓冲液及各种试剂的配制 | 第26-27页 |
| ·化合物库 | 第27-28页 |
| ·实验方法 | 第28-35页 |
| ·质粒的转化 | 第28页 |
| ·质粒的提取和酶切鉴定 | 第28-29页 |
| ·重组蛋白的大量诱导表达、纯化 | 第29-31页 |
| ·蛋白酶浓度的测定(BCA法) | 第31页 |
| ·蛋白酶的活性检测及高通量筛选体系的确定 | 第31-32页 |
| ·DMSO对JEV NS2B/NS3蛋白酶活性的影响 | 第32-33页 |
| ·Aprotinin对NS2B/NS3蛋白酶的抑制作用 | 第33页 |
| ·基于JEV NS3蛋白酶活性的小分子抑制剂筛选 | 第33-34页 |
| ·化合物碎片库的初筛 | 第33页 |
| ·化合物碎片库的复筛 | 第33-34页 |
| ·阳性抑制剂对WNV和DENV NS2B/NS3pro的抑制效果 | 第34页 |
| ·基于细胞水平的蛋白酶抑制剂的抗病毒活性研究 | 第34-35页 |
| ·化合物抑制JEV的细胞病变效应 | 第34页 |
| ·Western blot分析小分子化合物的抗病毒活性 | 第34-35页 |
| ·间接免疫荧光试验 | 第35页 |
| ·结果与分析 | 第35-49页 |
| ·质粒的双酶切鉴定 | 第35-36页 |
| ·三种病毒的NS2B/NS3Pro的Ni~(2+)-亲和层析纯化 | 第36-37页 |
| ·蛋白酶的酶切活性检测 | 第37-38页 |
| ·DMSO对JEV NS2B/NS3蛋白酶活性的影响 | 第38-39页 |
| ·Aprotinin对NS2B/NS3蛋白酶的抑制 | 第39-40页 |
| ·蛋白酶抑制剂高通量筛选 | 第40-44页 |
| ·小分子碎片库的初步筛选 | 第40-41页 |
| ·小分子化合物的复筛 | 第41-43页 |
| ·阳性化合物对WNV、DENV NS2B/NS3pro的抑制效果 | 第43-44页 |
| ·基于细胞水平的蛋白酶抑制剂的抗病毒活性研究 | 第44-49页 |
| ·化合物抑制JEV的细胞病变效应 | 第44-45页 |
| ·Western blot试验 | 第45-46页 |
| ·间接免疫荧光试验 | 第46-49页 |
| ·化合物与蛋白互作位点的预测 | 第49页 |
| ·讨论 | 第49-51页 |
| ·蛋白酶在E.coli中的表达和纯化 | 第50页 |
| ·小分子抑制剂的高通量筛选 | 第50-51页 |
| ·阳性抑制剂在WNV、DENV NS2B/NS3蛋白酶上的抑制 | 第51页 |
| ·阳性抑制剂在细胞水平上的抗病毒研究 | 第51页 |
| ·结论 | 第51-53页 |
| 第四章 JEV NS3蛋白酶单克隆抗体的制备 | 第53-63页 |
| ·实验材料 | 第53-54页 |
| ·细胞及实验动物 | 第53页 |
| ·主要药品及试剂 | 第53页 |
| ·主要培养基及其配制 | 第53页 |
| ·主要缓冲溶液及其配制 | 第53-54页 |
| ·试验方法 | 第54-58页 |
| ·免疫原和检测抗原的制备 | 第54页 |
| ·动物免疫 | 第54页 |
| ·间接ELISA检测方法的建立 | 第54-55页 |
| ·间接ELISA方法检测免疫小鼠的血清效价 | 第55页 |
| ·SP2/0骨髓瘤细胞的制备 | 第55页 |
| ·免疫脾细胞的制备 | 第55-56页 |
| ·细胞融合 | 第56页 |
| ·阳性杂交瘤细胞的筛选 | 第56页 |
| ·阳性杂交瘤细胞的亚克隆 | 第56-57页 |
| ·杂交瘤细胞的冻存 | 第57页 |
| ·单克隆抗体的大量制备 | 第57页 |
| ·单克隆抗体的效价鉴定 | 第57页 |
| ·单克隆抗体的间接免疫荧光检测 | 第57页 |
| ·单克隆抗体的Western blot检测 | 第57-58页 |
| ·结果与分析 | 第58-61页 |
| ·间接ELISA检测方法的建立 | 第58页 |
| ·免疫小鼠血清效价测定 | 第58-59页 |
| ·杂交瘤细胞株的筛选与建立 | 第59页 |
| ·单克隆抗体的效价测定 | 第59-60页 |
| ·单克隆抗体的间接免疫荧光检测 | 第60页 |
| ·单克隆抗体的Western blot分析 | 第60-61页 |
| ·讨论 | 第61-62页 |
| ·动物免疫 | 第61页 |
| ·细胞融合 | 第61页 |
| ·特异性单克隆抗体的筛选 | 第61-62页 |
| ·单克隆抗体特异性的鉴定 | 第62页 |
| ·结论 | 第62-63页 |
| 参考文献 | 第63-71页 |
| 致谢 | 第71页 |
