| 中文摘要 | 第1-9页 |
| Abstract | 第9-11页 |
| 第一章 文献综述 | 第11-24页 |
| 引言 | 第11页 |
| ·创伤弧菌的研究进展 | 第11-16页 |
| ·创伤弧菌的分类及生化特性 | 第12页 |
| ·创伤弧菌的分型 | 第12-13页 |
| ·创伤弧菌毒力因子 | 第13-16页 |
| ·DNA疫苗的研究进展 | 第16-22页 |
| ·DNA疫苗的申请标准 | 第18页 |
| ·DNA疫苗的构建 | 第18-19页 |
| ·DNA疫苗佐剂 | 第19-21页 |
| ·DNA疫苗的免疫途径及剂量 | 第21-22页 |
| ·DNA疫苗的免疫反应机制 | 第22页 |
| ·本文的研究目的及意义 | 第22-24页 |
| 第二章 创伤弧菌ompk和lpp的基因克隆与序列分析 | 第24-38页 |
| ·实验材料 | 第24-25页 |
| ·菌株和载体 | 第24页 |
| ·主要试剂及仪器 | 第24-25页 |
| ·实验方法 | 第25-28页 |
| ·创伤弧菌的培养 | 第25页 |
| ·DNA的提取 | 第25页 |
| ·lpp和ompk基因的PCR扩增 | 第25-26页 |
| ·目的基因的克隆 | 第26-28页 |
| ·实验结果 | 第28-37页 |
| ·目的基因的扩增 | 第28-29页 |
| ·重组质粒pMD18-T-lpp和pMD18-T-ompk的酶切鉴定 | 第29-30页 |
| ·基因测序 | 第30-31页 |
| ·lpp与ompk基因的序列分析 | 第31-37页 |
| ·讨论 | 第37-38页 |
| 第三章 创伤弧菌Lpp和OmpK蛋白的表达及多克隆抗体的制备 | 第38-51页 |
| ·实验材料 | 第38-39页 |
| ·实验动物 | 第38页 |
| ·主要试剂及仪器 | 第38-39页 |
| ·实验方法 | 第39-44页 |
| ·Lpp和OmpK蛋白的原核表达 | 第39-41页 |
| ·Lpp和OmpK蛋白的纯化 | 第41-42页 |
| ·BCA法测定蛋白浓度 | 第42页 |
| ·多克隆抗体的制备 | 第42-43页 |
| ·多克隆抗体的检测 | 第43-44页 |
| ·实验结果 | 第44-49页 |
| ·重组质粒pET-32a-lpp和pET-32a-ompk的酶切鉴定 | 第44-45页 |
| ·Lpp和OmpK蛋白的诱导表达 | 第45页 |
| ·Lpp和OmpK蛋白超声破碎后样品检测 | 第45-46页 |
| ·Lpp蛋白的纯化 | 第46页 |
| ·BCA法测蛋白浓度 | 第46-47页 |
| ·ELISA检测血清效价 | 第47-48页 |
| ·Western-blot检测血清特异性 | 第48-49页 |
| ·讨论 | 第49-51页 |
| 第四章 重组质粒的真核表达与检测 | 第51-65页 |
| ·实验材料 | 第51-52页 |
| ·细胞与质粒 | 第51页 |
| ·主要试剂及仪器 | 第51-52页 |
| ·实验方法 | 第52-59页 |
| ·真核表达重组质粒的构建 | 第52-53页 |
| ·293细胞的培养 | 第53页 |
| ·重组质粒转染293细胞 | 第53-55页 |
| ·RT-PCR检测重组质粒的表达 | 第55-57页 |
| ·Western-blot检测 | 第57-59页 |
| ·实验结果 | 第59-64页 |
| ·真核表达重组质粒的双酶切鉴定 | 第59页 |
| ·荧光检测转染结果 | 第59-61页 |
| ·RT-PCR检测结果 | 第61-62页 |
| ·BCA法测定蛋白浓度 | 第62页 |
| ·Western-blot检测结果 | 第62-64页 |
| ·讨论 | 第64-65页 |
| 第五章 结论 | 第65-66页 |
| 附录 (主要试剂配方) | 第66-69页 |
| 参考文献 | 第69-75页 |
| 致谢 | 第75页 |
