| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-10页 |
| 图表清单 | 第10-11页 |
| 1. 文献综述 | 第11-18页 |
| ·植物花粉发育过程中所表达的基因 | 第11-12页 |
| ·花粉的发育过程 | 第11页 |
| ·调控花粉发育的基因 | 第11页 |
| ·对花粉调控基因的研究 | 第11-12页 |
| ·实时荧光定量 PCR | 第12-13页 |
| ·实时荧光定量 RCR 的发展 | 第12页 |
| ·实时荧光定量 RCR 的四种类型 | 第12页 |
| ·Taqman 探针和 SYBR Green Ⅰ | 第12-13页 |
| ·基因干涉技术 | 第13-15页 |
| ·反义 RNA 技术 | 第13-14页 |
| ·RNAi 技术 | 第14-15页 |
| ·花粉管通道法 | 第15-18页 |
| ·花粉管通道法的总体发展 | 第15-16页 |
| ·花粉管通道法导入外源 DNA 的方法 | 第16页 |
| ·花粉管通道法的机理 | 第16-17页 |
| ·花粉管通道法的优缺点 | 第17-18页 |
| 2. 引言 | 第18-20页 |
| ·研究的目的、意义 | 第18页 |
| ·研究内容 | 第18-19页 |
| ·技术路线 | 第19-20页 |
| 3. 材料与方法 | 第20-34页 |
| ·实验材料 | 第20页 |
| ·仪器与试剂 | 第20-22页 |
| ·实验仪器 | 第20-21页 |
| ·主要试剂 | 第21页 |
| ·实验中常用试剂配方 | 第21-22页 |
| ·实验方法 | 第22-34页 |
| ·总 RNA 的提取和检测 | 第22-24页 |
| ·茶树叶片总 RNA 的提取 | 第22-23页 |
| ·总 RNA 的质量检测 | 第23-24页 |
| ·荧光定量 PCR 检测 | 第24-26页 |
| ·茶树花粉特异蛋白基因片段的扩增 | 第26-29页 |
| ·总RNA提取与检测 | 第26页 |
| ·cDNA 第一链的合成 | 第26页 |
| ·引物设计与合成 | 第26页 |
| ·茶树花粉特异蛋白基因片段的扩增 | 第26-27页 |
| ·凝胶电泳回收 PCR 产物 | 第27-28页 |
| ·PCR 产物与 pMD18-T Simple Vector 链接 | 第28页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞 JM109 的制备 | 第28页 |
| ·转化大肠杆菌 JM109 | 第28-29页 |
| ·菌落 PCR 法筛选鉴定重组子 | 第29页 |
| ·DNA 序列的测定 | 第29页 |
| ·反义载体构建 | 第29-30页 |
| ·质粒提取 | 第29页 |
| ·双酶切 | 第29-30页 |
| ·凝胶电泳回收酶切产物 | 第30页 |
| ·构建重组载体 pGEM- CsPSP1 | 第30页 |
| ·重组子的检测与测序 | 第30页 |
| ·反义载体 pBI121-asCsPSP1 构建 | 第30页 |
| ·双链 RNA 表达载体的构建 | 第30-32页 |
| ·引物设计 | 第30-31页 |
| ·PCR 扩增及 pGEM 载体构建 | 第31页 |
| ·双链表达载体构建 | 第31-32页 |
| ·花粉管通道法导入茶树 | 第32-34页 |
| ·导入方法 | 第32-33页 |
| ·收获茶籽并种植 | 第33-34页 |
| 4. 结果与分析 | 第34-44页 |
| ·RNA 样品的质量 | 第34-35页 |
| ·荧光定量 PCR | 第35-37页 |
| ·普通 PCR 设定退火温度 | 第35页 |
| ·标准曲线 | 第35-36页 |
| ·溶解曲线分析 | 第36页 |
| ·荧光定量 PCR | 第36-37页 |
| ·反义载体的构建 | 第37-39页 |
| ·茶树花粉特异蛋白基因 CsPSP1 的克隆 | 第37-38页 |
| ·克隆载体 pGEM-CsPSP1 的构建 | 第38页 |
| ·反义表达载体的构建 | 第38-39页 |
| ·双链载体构建 | 第39-42页 |
| ·asCsPSP1-GUS 片段的克隆 | 第39-41页 |
| ·重组质粒 pGEM-dsCsPSP1 的构建 | 第41页 |
| ·重组质粒 pBI-dsCsPSP1 的构建 | 第41-42页 |
| ·花粉管通道法 | 第42-44页 |
| 5. 讨论 | 第44-47页 |
| ·茶树花蕾不同发育时期 CSPSP1基因的荧光定量 PCR 分析 | 第44页 |
| ·反义表达载体PBI-asCSPSP1的构建 | 第44-45页 |
| ·RNAI表达载体PBI-dsCSPSP1的构建 | 第45-46页 |
| ·花粉管通道法 | 第46-47页 |
| 6．结论 | 第47-48页 |
| 参考文献 | 第48-54页 |
| 致谢 | 第54-55页 |
| 作者简介 | 第55页 |
| 在读期间发表的学术论文清单 | 第55页 |