| 摘要 | 第1-7页 |
| ABSTRACT | 第7-14页 |
| 英文缩略词表 | 第14-16页 |
| 前言 | 第16-19页 |
| 第一章 在急性白血病细胞株中PTEN/PI3K/AKT通路对ABCG2及旁系群体SP的调控 | 第19-44页 |
| ·材料与方法 | 第20-34页 |
| ·主要试剂 | 第20-22页 |
| ·主要仪器 | 第22-23页 |
| ·主要试剂的配制 | 第23-25页 |
| ·细胞培养 | 第25页 |
| ·慢病毒感染系统 | 第25-28页 |
| ·感受态细胞制备 | 第25页 |
| ·转化 | 第25-26页 |
| ·质粒大抽提 | 第26页 |
| ·病毒制作与收集 | 第26-27页 |
| ·病毒滴度测定 | 第27-28页 |
| ·白血病细胞株的感染 | 第28页 |
| ·RT-PCR | 第28-30页 |
| ·提取RNA | 第28页 |
| ·合成cDNA | 第28-29页 |
| ·PCR反应 | 第29-30页 |
| ·PCR产物电泳跑胶 | 第30页 |
| ·Western Blot检测方法 | 第30-33页 |
| ·制备蛋白样本 | 第30-31页 |
| ·采用BCA法测蛋白浓度 | 第31页 |
| ·SDS-PAGE电泳 | 第31-32页 |
| ·转膜 | 第32页 |
| ·免疫反应 | 第32-33页 |
| ·化学发光 | 第33页 |
| ·FACS检测ABCG2 | 第33页 |
| ·荧光染料Hoechst33342拒染试验 | 第33页 |
| ·CCK8方法检测药物抑制率 | 第33-34页 |
| ·统计方法 | 第34页 |
| ·结果 | 第34-35页 |
| ·在急性白血病细胞株中PTEN/PI3K/Akt信号通路调控ABCG2的表达 | 第34页 |
| ·在急性白血病细胞株中PTEN/PI3K/Akt信号通路调控SP群体数目百分比 | 第34-35页 |
| ·在急性白血病细胞株中抑制PI3K/Akt信号通路可增加细胞对药物敏感性 | 第35页 |
| ·讨论 | 第35-36页 |
| ·结论 | 第36-37页 |
| 附图 | 第37-44页 |
| 第二章 在成人急性白血病中PTEN/PI3K/AKT通路对ABCG2及旁系群体SP的调控 | 第44-57页 |
| ·材料与方法 | 第44-46页 |
| ·主要试剂 | 第44页 |
| ·主要仪器 | 第44页 |
| ·临床样本收集 | 第44-45页 |
| ·主要试剂的配制 | 第45页 |
| ·实时定量RT-PCR | 第45-46页 |
| ·RNA的提取 | 第45页 |
| ·RNA的逆转录 | 第45-46页 |
| ·PCR反应 | 第46页 |
| ·Western Blot检测方法 | 第46页 |
| ·FACS检测ABCG2 | 第46页 |
| ·荧光染料Hoechst33342拒染试验 | 第46页 |
| ·统计方法 | 第46页 |
| ·结果 | 第46-48页 |
| ·在成人AML患者中ABCG2蛋白水平无明显差异 | 第46-47页 |
| ·在成人AML肿瘤细胞中SP群体细胞比例明显增高 | 第47页 |
| ·在成人AML患者中PTEN蛋白缺失上调p-PI3K | 第47页 |
| ·在成人复发/难治ALL患者中ABCG2+细胞比例明显增高 | 第47-48页 |
| ·在成人ALL肿瘤细胞中SP群体细胞比例明显增高 | 第48页 |
| ·在成人ALL患者中PTEN蛋白缺失上调p-PI3K | 第48页 |
| ·讨论 | 第48-49页 |
| ·结论 | 第49-50页 |
| 附图 | 第50-57页 |
| 第三章 在慢性粒细胞白血病细胞株中PTEN/PI3K/AKT通路对ABCG2及旁系群体SP的调控 | 第57-70页 |
| ·材料与方法 | 第58-61页 |
| ·主要试剂 | 第58页 |
| ·主要仪器 | 第58页 |
| ·主要试剂的配制 | 第58页 |
| ·细胞培养 | 第58-59页 |
| ·慢病毒感染系统 | 第59页 |
| ·RT-PCR | 第59页 |
| ·Western Blot检测方法 | 第59页 |
| ·FACS检测ABCG2 | 第59页 |
| ·荧光染料Hoechst33342拒染试验 | 第59页 |
| ·CCK-8方法检测药物抑制率 | 第59页 |
| ·细胞周期检测 | 第59-60页 |
| ·细胞样品的准备 | 第59-60页 |
| ·细胞固定 | 第60页 |
| ·碘化丙啶染色液的配制 | 第60页 |
| ·染色 | 第60页 |
| ·流式检测和分析 | 第60页 |
| ·细胞凋亡检测 | 第60-61页 |
| ·统计学方法 | 第61页 |
| ·结果 | 第61-63页 |
| ·在K562细胞株过表达ABCG2可以增强细胞对于米托蒽醌的耐药性,同时减弱米托蒽醌抑制DNA合成的作用 | 第61页 |
| ·慢性粒细胞白血病细胞株中ABCG2表达增高可以促使SP群体数目比例增多 | 第61-62页 |
| ·K562耐药株PTEN蛋白水平下调,而p-Akt蛋白水平上调 | 第62页 |
| ·PTEN/PI3K/Akt信号通路调控ABCG2+及SP表型数目比例 | 第62页 |
| ·抑制PI3K/Akt信号通路可以降低白血病细胞对米托葸醌的耐药性 | 第62-63页 |
| ·讨论 | 第63-64页 |
| ·结论 | 第64-65页 |
| 附图 | 第65-70页 |
| 第四章 在慢性粒细胞白血病中PTEN/PI3K/AKT通路对ABCG2及旁系群体SP的调控 | 第70-76页 |
| ·材料与方法 | 第70-71页 |
| ·主要试剂 | 第70页 |
| ·主要仪器 | 第70-71页 |
| ·主要试剂的配制 | 第71页 |
| ·临床样本收集 | 第71页 |
| ·实时定量RT-PCR | 第71页 |
| ·Western Blot检测方法 | 第71页 |
| ·FACS检测ABCG2 | 第71页 |
| ·荧光染料Hoechst33342拒染试验 | 第71页 |
| ·统计方法 | 第71页 |
| ·结果 | 第71-72页 |
| ·在CML患者中ABCG2表达无明显差异,处于AP/BP阶段的CML患者SP群体数目比例增高 | 第72页 |
| ·在CML中PTEN蛋白缺失,然而p-Akt蛋白上调 | 第72页 |
| ·讨论 | 第72-73页 |
| ·结论 | 第73-74页 |
| 附图 | 第74-76页 |
| 参考文献 | 第76-85页 |
| 综述 | 第85-100页 |
| 结语 | 第91-92页 |
| 参考文献 | 第92-100页 |
| 攻读博士学位期间的主要研究成果 | 第100-101页 |
| 本课题基金资助 | 第101-102页 |
| 致谢 | 第102页 |
