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葡萄胚珠发育相关基因βVPE及metacaspase家族的克隆与分析

摘要第1-8页
ABSTRACT第8-13页
第一章 文献综述第13-19页
   ·植物液泡加工酶(VPE)研究进展第13-14页
   ·植物 metacaspase 研究进展第14-16页
   ·假单性结实型葡萄无核机理研究进展第16-17页
   ·本研究的目的意义第17-19页
第二章 葡萄βVPE 基因的克隆与序列分析第19-25页
   ·材料与方法第19-20页
     ·试验材料第19页
     ·试验方法第19-20页
   ·结果与分析第20-22页
     ·黑比诺葡萄βVPE 基因克隆、染色体定位及基因结构分析第20页
     ·黑比诺葡萄βVPE 基因多序列比对与进化树分析第20-22页
     ·不同葡萄品种中的βVPE 基因的克隆与序列分析第22页
   ·讨论第22-25页
第三章 葡萄 VvβVPE 基因的原核表达、纯化与多克隆抗体制备第25-33页
   ·材料与方法第25-27页
     ·试验材料第25页
     ·试验方法第25-27页
   ·结果与分析第27-32页
     ·RT-PCR 扩增获得 VvβVPE 基因开放阅读框第27-28页
     ·葡萄胚发育相关基因 VvβVPE 原核表达载体的构建第28页
     ·GST- VvβVPE 融合蛋白在大肠杆菌中的诱导表达第28-29页
     ·GST- VvβVPE 融合蛋白表达形式的确定及其表达条件的优化第29-30页
     ·GST- VvβVPE 融合蛋白的纯化第30-31页
     ·GST- VvβVPE 多克隆抗血清的 western blot 检测第31-32页
   ·讨论第32-33页
第四章 葡萄βVPE 基因的表达分析第33-42页
   ·材料与方法第33-34页
     ·试验材料第33页
     ·试验方法第33-34页
   ·结果与分析第34-40页
     ·葡萄βVPE 基因在不同葡萄种类中的组织特异性表达分析第34页
     ·葡萄βVPE 基因在不同品种胚珠各个生长发育阶段的 qPCR 表达分析第34-35页
     ·不同品种葡萄βVPE 基因在胚珠不同发育阶段蛋白水平的表达分析第35-38页
     ·葡萄βVPE 基因在不同品种盛花后 30d,60d 胚珠中的表达分析第38-40页
   ·讨论第40-42页
第五章 葡萄胚珠特异表达βVPE 基因的功能验证第42-49页
   ·材料与方法第42-43页
     ·试验材料第42页
     ·试验方法第42-43页
   ·结果与分析第43-48页
     ·PCR 获得βVPE 基因的开放阅读框(ORF)序列第43-44页
     ·葡萄βVPE 基因植物表达载体的构建及转化 GV3101 菌液 PCR 鉴定第44-45页
     ·葡萄βVPE 转基因拟南芥 T3 代的 PCR 检测第45页
     ·葡萄βVPE 转基因拟南芥 T3 代种子总蛋白、粗酶液 SDS-PAGE 表型鉴定及其 western bolt 分析第45-46页
     ·葡萄βVPE 转基因拟南芥种子的 VPE 酶活性分析第46-47页
     ·葡萄βVPE 转基因拟南芥种子发芽速度的差异分析第47-48页
   ·讨论第48-49页
第六章 Metacaspase 基因家族在葡萄中的克隆及分析第49-62页
   ·材料与方法第49-50页
     ·试验材料第49-50页
     ·试验方法第50页
   ·结果与分析第50-60页
     ·黑比诺葡萄 metacaspase 家族成员的分离与鉴定第50-51页
     ·黑比诺葡萄 metacaspase 基因家族在染色体的定位与基因结构分析第51-53页
     ·黑比诺葡萄 metacaspase 多序列比对及系统发育树分析第53-55页
     ·黑比诺葡萄 metacaspase 家族基因启动子序列的顺式作用元件分析第55-57页
     ·葡萄 metacaspase 家族基因的 QRT-PCR 表达分析第57-60页
   ·讨论第60-62页
第七章 结论第62-63页
参考文献第63-69页
致谢第69-70页
作者简介第70页

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