| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-11页 |
| 符号说明 | 第11-14页 |
| 第一部分 文献综述 | 第14-27页 |
| 1 H9N2亚型禽流感病毒的分子病原学特征 | 第14-15页 |
| 2 H9N2亚型禽流感病毒的遗传进化 | 第15页 |
| 3 H9N2亚型禽流感病毒的变异特性 | 第15-16页 |
| 4 H9N2亚型禽流感的流行特点 | 第16-17页 |
| 5 H9N2亚型禽流感的疫苗研究 | 第17-18页 |
| 6 H9N2亚型禽流感病毒的诊断技术 | 第18页 |
| 7 H9N2亚型禽流感病毒对人类的潜在威胁 | 第18-19页 |
| 8 结论 | 第19-20页 |
| 参考文献 | 第20-27页 |
| 第二部分 实验内容 | 第27-75页 |
| 第一章 H9N2亚型禽流感病毒的单克隆抗体制备 | 第27-43页 |
| 1 材料 | 第27-30页 |
| ·病毒株 | 第27页 |
| ·SPF鸡胚、试验动物、细胞系 | 第27-28页 |
| ·主要试剂 | 第28页 |
| ·主要试剂的配制 | 第28-30页 |
| ·细胞培养相关试剂的配制 | 第28页 |
| ·ELISA实验相关试剂的配制 | 第28-29页 |
| ·SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)相关试剂的配制 | 第29页 |
| ·Western blotting相关试剂的配制 | 第29-30页 |
| ·主要设备仪器及耗材 | 第30页 |
| 2 方法 | 第30-36页 |
| ·抗原的制备 | 第30-31页 |
| ·病毒增殖 | 第30页 |
| ·病毒灭活 | 第30-31页 |
| ·病毒纯化 | 第31页 |
| ·动物免疫 | 第31页 |
| ·杂交瘤细胞株的建立与筛选 | 第31-34页 |
| ·饲养细胞的制备 | 第31-32页 |
| ·SP2/0细胞的制备 | 第32页 |
| ·脾细胞的制备 | 第32页 |
| ·细胞融合 | 第32-33页 |
| ·抗原最适包被浓度的确定 | 第33页 |
| ·杂交瘤细胞上清的检测 | 第33页 |
| ·杂交瘤细胞的克隆化 | 第33-34页 |
| ·杂交瘤细胞的冻存与复苏 | 第34页 |
| ·单克隆抗体腹水的制备及抗体效价的测定 | 第34页 |
| ·单克隆抗体的特异性鉴定 | 第34-35页 |
| ·单克隆抗体鸡胚半数保护量的测定 | 第35页 |
| ·单克隆抗体的Western blotting鉴定 | 第35页 |
| ·病毒抗原的免疫组织化学检测 | 第35-36页 |
| ·攻毒实验 | 第35页 |
| ·免疫组织化学实验 | 第35-36页 |
| 3 结果 | 第36-39页 |
| ·抗原的制备 | 第36页 |
| ·细胞融合 | 第36页 |
| ·抗原最适包被浓度的确定 | 第36-37页 |
| ·杂交瘤细胞株的建立与筛选 | 第37页 |
| ·单克隆抗体的细胞培养上清效价和腹水效价 | 第37页 |
| ·单克隆抗体的特异性鉴定 | 第37页 |
| ·单克隆抗体鸡胚半数保护量的测定 | 第37-38页 |
| ·Western blotting结果 | 第38页 |
| ·病毒抗原的免疫组织化学检测结果 | 第38-39页 |
| 4 讨论 | 第39-41页 |
| 5 结论 | 第41-42页 |
| 参考文献 | 第42-43页 |
| 第二章 H9N2亚型禽流感病毒的传播特性研究 | 第43-57页 |
| 1 材料 | 第43-44页 |
| ·病毒株 | 第43页 |
| ·试验动物 | 第43页 |
| ·SPF鸡红细胞、H9N2亚型单克隆抗体、H9亚型禽流感阳性血清 | 第43页 |
| ·主要试剂 | 第43-44页 |
| ·主要试剂的配制 | 第44页 |
| ·主要设备仪器 | 第44页 |
| 2 方法 | 第44-48页 |
| ·毒株纯化 | 第44-45页 |
| ·病毒增殖和鸡胚死亡平均时间(MDT)的测定 | 第45页 |
| ·H9N2亚型油乳剂疫苗制备与阳性血清的制备 | 第45页 |
| ·清学试验 | 第45页 |
| ·病毒血凝素热稳定性的测定 | 第45-46页 |
| ·鸡胚半数感染量和鸡胚半数死亡量的测定 | 第46页 |
| ·传播性试验 | 第46-47页 |
| ·动物试验分组 | 第46页 |
| ·分组布置 | 第46页 |
| ·病毒接种 | 第46页 |
| ·样品采集及检测 | 第46-47页 |
| ·致病性实验 | 第47-48页 |
| ·动物实验分组 | 第47页 |
| ·临床症状及剖检病变 | 第47页 |
| ·病料的采集与处理 | 第47页 |
| ·石蜡切片制作 | 第47-48页 |
| ·免疫组织化学实验 | 第48页 |
| 3 结果 | 第48-54页 |
| ·血清学试验结果 | 第48页 |
| ·H9N2亚型油乳剂疫苗与阳性血清的检测结果 | 第48页 |
| ·鸡胚平均死亡时间测定试验结果 | 第48页 |
| ·病毒血凝素热稳定性试验测定结果 | 第48-49页 |
| ·鸡胚半数感染量和鸡胚半数死亡量的试验测定结果 | 第49-50页 |
| ·传播性试验结果 | 第50-51页 |
| ·致病性试验结果 | 第51-54页 |
| ·临床症状及剖检病变 | 第51-52页 |
| ·病理组织学变化结果 | 第52-53页 |
| ·免疫组化染色结果 | 第53-54页 |
| 4 讨论 | 第54-55页 |
| 5 结论 | 第55-56页 |
| 参考文献 | 第56-57页 |
| 第三章 H9N2亚型禽流感病毒的HA和NA基因的序列分析 | 第57-75页 |
| 1 材料 | 第57-58页 |
| ·病毒株 | 第57页 |
| ·SPF鸡胚 | 第57页 |
| ·H9亚型禽流感阳性血清 | 第57页 |
| ·主要试剂 | 第57-58页 |
| ·主要试剂配制 | 第58页 |
| ·主要设备仪器及分子生物学分析软件 | 第58页 |
| 2 方法 | 第58-64页 |
| ·病毒复苏与增殖 | 第58页 |
| ·引物的设计和合成 | 第58-59页 |
| ·反转录(RT)引物设计 | 第58页 |
| ·HA基因和NA基因的RT-PCR引物设计 | 第58-59页 |
| ·病毒总RNA的提取 | 第59页 |
| ·病毒基因组的反转录(RT)反应 | 第59-60页 |
| ·HA基因的扩增 | 第60页 |
| ·NA基因的扩增 | 第60-61页 |
| ·HA基因和NA基因的测序 | 第61-62页 |
| ·PCR产物的回收 | 第61页 |
| ·感受态细胞的制备 | 第61页 |
| ·PCR产物的连接 | 第61-62页 |
| ·质粒转化 | 第62页 |
| ·质粒提取 | 第62页 |
| ·酶切鉴定 | 第62页 |
| ·HA基因和NA基因的序列测定 | 第62页 |
| ·HA基因和NA基因序列比较分析及进化树的绘制 | 第62-64页 |
| 3 结果 | 第64-70页 |
| ·RT-PCR扩增结果及测序结果 | 第64-65页 |
| ·HA基因和NA基因核苷酸同源性比较 | 第65-66页 |
| ·HA基因和NA基因的遗传进化树 | 第66-67页 |
| ·HA基因的关键位点氨基酸的分析 | 第67-69页 |
| ·NA基因的关键位点氨基酸分析 | 第69-70页 |
| 4 讨论 | 第70-72页 |
| 5 结论 | 第72-73页 |
| 参考文献 | 第73-75页 |
| 致谢 | 第75-76页 |
| 发表论文 | 第76-77页 |
