| 摘要 | 第1-7页 |
| ABSTRACT | 第7-8页 |
| 符号说明 | 第8-9页 |
| 文献综述 | 第9-22页 |
| 1 水稻纹枯病 | 第9-12页 |
| ·发生、危害与防治 | 第9-11页 |
| ·发生与危害 | 第9页 |
| ·病害的防治及存在问题 | 第9-11页 |
| ·水稻抗纹枯病育种现状 | 第11-12页 |
| ·抗性种质的筛选 | 第11-12页 |
| ·转基因育种 | 第12页 |
| 2 植物抗病基因 | 第12-15页 |
| ·抗病基因种类 | 第12-13页 |
| ·作用机理 | 第13-14页 |
| ·抗病育种 | 第14-15页 |
| 3 植物多聚半乳糖醛酸酶抑制蛋白(PGIP) | 第15-21页 |
| ·PGIP的分布 | 第16-17页 |
| ·PGIP的结构及特性 | 第17-19页 |
| ·PGIP结构 | 第17-19页 |
| ·PGIP的理化特性 | 第19页 |
| ·PGIP在抗病育种中的作用 | 第19-21页 |
| ·植物抗病因子 | 第19-20页 |
| ·PGIP的抗病机理 | 第20-21页 |
| ·PGIP的抗病育种前景 | 第21页 |
| 4 本课题研究目的和意义 | 第21-22页 |
| 5 课题的创新性或创造性 | 第22页 |
| 1 材料与方法 | 第22-35页 |
| ·试验材料 | 第22-23页 |
| ·水稻基因组DNA的提取(CTAB法) | 第23-25页 |
| ·PCR扩增 | 第25页 |
| ·水稻Ospgip基因的PCR扩增 | 第25页 |
| ·水稻Ospgip2突变基因的PCR扩增 | 第25页 |
| ·载体构建 | 第25-27页 |
| ·克隆载体的构建 | 第25-26页 |
| ·原核表达载体的构建 | 第26页 |
| ·超表达载体的构建 | 第26-27页 |
| ·感受态细胞的制备与转化 | 第27页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的制备 | 第27页 |
| ·质粒转化 | 第27页 |
| ·重组质粒的验证 | 第27-30页 |
| ·提取质粒试剂的配制 | 第28页 |
| ·重组质粒的提取(碱裂解法) | 第28页 |
| ·酶切验证 | 第28-30页 |
| ·生物信息学分析 | 第30页 |
| ·原核表达产物的提取与检测 | 第30-31页 |
| ·OsPGIP包涵体粗蛋白的提取 | 第30-31页 |
| ·病菌PG酶的提取 | 第31页 |
| ·表达产物SDS-PAGE检测 | 第31页 |
| ·表达产物抑制PG活性测定 | 第31-33页 |
| ·根癌农杆菌介导的遗传转化体系的建立 | 第33-34页 |
| ·农杆菌感受态细胞的制备 | 第33页 |
| ·外源质粒导入农杆菌 | 第33页 |
| ·愈伤组织的培养及转基因植株的获得 | 第33-34页 |
| ·田间病害抗性鉴定 | 第34-35页 |
| ·田间试验设计 | 第34-35页 |
| ·菌系及接种方法 | 第35页 |
| ·病级调查 | 第35页 |
| 2 结果与分析 | 第35-54页 |
| ·转Ospgip1基因水稻对纹枯病的研究 | 第35-41页 |
| ·水稻Ospgip1基因的克隆与生物信息学分析 | 第35-38页 |
| ·水稻Ospgip1基因的克隆和序列分析 | 第35-37页 |
| ·蛋白质一级结构分析 | 第37-38页 |
| ·Ospgip1基因在水稻中的过表达 | 第38-41页 |
| ·表达载体的构建与验证 | 第38-39页 |
| ·重组质粒导入农杆菌 | 第39页 |
| ·转Ospgip1基因植株的获得与抗性鉴定 | 第39-41页 |
| ·转Ospgip2突变基因水稻对纹枯病的抗性 | 第41-54页 |
| ·水稻Ospgip2基因的克隆和生物信息学分析 | 第41-46页 |
| ·水稻Ospgip2基因的克隆和序列分析 | 第41-43页 |
| ·蛋白质一级结构分析 | 第43-45页 |
| ·蛋白质二级结构分析 | 第45页 |
| ·蛋白质三级结构分析 | 第45-46页 |
| ·其它特性预测 | 第46页 |
| ·OsPGIP2 LRR区单氨基酸替换 | 第46-50页 |
| ·碱基突变序列的获得 | 第46-48页 |
| ·氨基酸突变序列分析 | 第48-50页 |
| ·Ospgip2突变基因的原核表达 | 第50-52页 |
| ·表达载体的构建 | 第50页 |
| ·转化 | 第50-51页 |
| ·诱导表达 | 第51页 |
| ·表达产物对水稻纹枯病菌PG的抑制作用 | 第51-52页 |
| ·突变基因Ospgip2~(L233F)在水稻中的过表达 | 第52-54页 |
| ·表达载体的构建与转化 | 第52-53页 |
| ·转Ospgip2~(L233F)基因植株的获得与抗病性鉴定 | 第53-54页 |
| 3 讨论 | 第54-58页 |
| ·转基因技术在植物抗病遗传育种上的应用 | 第54-55页 |
| ·Pgip基因在植物抗病遗传育种中的应用 | 第55-56页 |
| ·定点突变技术是研究基因功能的重要手段 | 第56-58页 |
| 参考文献 | 第58-65页 |
| 附录 | 第65-68页 |
| 致谢 | 第68-69页 |