| 摘要 | 第1-8页 |
| Abstract | 第8-15页 |
| 第一章 引言 | 第15-21页 |
| ·核酸疫苗的发现 | 第15页 |
| ·核酸疫苗的作用机理 | 第15-16页 |
| ·核酸疫苗的优缺点 | 第16-17页 |
| ·核酸疫苗免疫效果的影响因素 | 第17-18页 |
| ·细胞因子作为佐剂的应用 | 第18页 |
| ·鸡球虫 DNA 疫苗的研究 | 第18-19页 |
| ·展望 | 第19-21页 |
| 第二章 柔嫩艾美耳球虫 4 种基因及鸡 IFN-γ、IL-2 基因的克隆 | 第21-33页 |
| ·引言 | 第21页 |
| ·材料与方法 | 第21-27页 |
| ·cDNA 模板、菌株 | 第21页 |
| ·主要试剂及工具酶 | 第21-22页 |
| ·主要实验仪器 | 第22页 |
| ·主要试剂的配制 | 第22页 |
| ·EtAMA1 基因引物的设计、PCR 扩增及克隆 | 第22-24页 |
| ·EtSerpin 基因引物设计、PCR 扩增及克隆 | 第24-25页 |
| ·EtRON2 基因引物设计、PCR 扩增及克隆 | 第25页 |
| ·EtCDPK3 基因引物设计、PCR 扩增及克隆 | 第25-26页 |
| ·IFN-γ基因引物设计、PCR 扩增及克隆 | 第26页 |
| ·IL-2 基因引物设计、PCR 扩增及克隆 | 第26-27页 |
| ·结果 | 第27-31页 |
| ·EtAMA1 基因 PCR 扩增结果及序列分析 | 第27-28页 |
| ·EtSerpin 基因 PCR 扩增结果及序列分析 | 第28页 |
| ·EtRON2 基因 PCR 扩增结果及序列分析 | 第28-29页 |
| ·EtCDPK3 基因 PCR 扩增结果及序列分析 | 第29页 |
| ·鸡 IFN-γ、IL-2 基因 PCR 扩增结果及序列分析 | 第29-31页 |
| ·讨论 | 第31-33页 |
| 第三章 柔嫩艾美耳球虫 4 种基因真核重组质粒的构建 | 第33-41页 |
| ·引言 | 第33页 |
| ·材料与方法 | 第33-35页 |
| ·菌种与载体 | 第33页 |
| ·主要试剂 | 第33-34页 |
| ·主要实验仪器 | 第34页 |
| ·DNA 疫苗的构建 | 第34-35页 |
| ·结果 | 第35-39页 |
| ·重组质粒 pCAGGS-EtAMA1 的 PCR 及双酶切鉴定结果 | 第35页 |
| ·重组质粒 pCAGGS-EtSerpin 的 PCR 及双酶切鉴定结果 | 第35页 |
| ·重组质粒 pCAGGS-EtRON2 的 PCR 及双酶切鉴定结果 | 第35-36页 |
| ·重组质粒 pCAGGS-EtCDPK3 的 PCR 及双酶切鉴定结果 | 第36-37页 |
| ·重组质粒 pCAGGS-EtAMA1-IFN-γ的 PCR 及测序鉴定 | 第37-38页 |
| ·重组质粒 pCAGGS-EtRON2-IFN-γ的构建 | 第38-39页 |
| ·讨论 | 第39-41页 |
| 第四章 柔嫩艾美耳球虫 4 种基因真核重组质粒在 293T 细胞中的表达 | 第41-52页 |
| ·引言 | 第41页 |
| ·材料与方法 | 第41-46页 |
| ·抗体与细胞 | 第41页 |
| ·主要试剂 | 第41-42页 |
| ·主要实验仪器 | 第42页 |
| ·主要试剂的配制 | 第42页 |
| ·重组质粒 pCAGGS-EtAMA1 转染 293T 细胞 | 第42-44页 |
| ·重组质粒 pCAGGS-EtSerpin 转染 293T 细胞 | 第44页 |
| ·重组质粒 pCAGGS-EtRON2 转染 293T 细胞 | 第44页 |
| ·重组质粒 pCAGGS-EtCDPK3 转染 293T 细胞 | 第44页 |
| ·间接免疫荧光（IFA）鉴定 pCAGGS-EtAMA1 的表达情况 | 第44页 |
| ·间接免疫荧光（IFA）鉴定 pCAGGS-EtSerpin 的表达情况 | 第44页 |
| ·间接免疫荧光（IFA）鉴定 pCAGGS-EtRON2 的表达情况 | 第44-45页 |
| ·间接免疫荧光（IFA）鉴定 pCAGGS-EtCDPK3 的表达情况 | 第45页 |
| ·Western blot 鉴定 pCAGGS-EtAMA1 的表达情况 | 第45页 |
| ·Western blot 鉴定 pCAGGS-EtSerpin 的表达情况 | 第45-46页 |
| ·Western blot 鉴定 pCAGGS-EtRON2 的表达情况 | 第46页 |
| ·Western blot 鉴定 pCAGGS-EtCDPK3 的表达情况 | 第46页 |
| ·结果 | 第46-50页 |
| ·间接免疫荧光（IFA）检测 pCAGGS-EtAMA1 在 293T 细胞中的表达 | 第46页 |
| ·间接免疫荧光（IFA）检测 pCAGGS-EtSerpin 在 293T 细胞中的表达 | 第46-47页 |
| ·间接免疫荧光（IFA）检测 pCAGGS-EtRON2 在 293T 细胞中的表达 | 第47页 |
| ·间接免疫荧光（IFA）检测 pCAGGS-EtCDPK3 在 293T 细胞中的表达 | 第47-48页 |
| ·Western-blot 分析 pCAGGS-EtAMA1 在 293T 细胞中的表达 | 第48页 |
| ·Western-blot 分析 pCAGGS-EtSerpin 在 293T 细胞中的表达 | 第48-49页 |
| ·Western-blot 分析 pCAGGS-EtRON2 在 293T 细胞中的表达 | 第49页 |
| ·Western-blot 分析 pCAGGS-EtCDPK3 在 293T 细胞中的表达 | 第49-50页 |
| ·讨论 | 第50-52页 |
| 第五章 柔嫩艾美耳球虫重组质粒pCAGGS-EtAMA1和pCAGGS-EtAMA1-IFN-γ的免疫保护性实验 | 第52-59页 |
| ·引言 | 第52页 |
| ·材料与方法 | 第52-56页 |
| ·实验动物及虫株 | 第52页 |
| ·主要实验仪器 | 第52-53页 |
| ·EtAMA1 重组质粒的大量制备 | 第53-54页 |
| ·实验分组及时间安排 | 第54-55页 |
| ·免疫过程中的增重变化 | 第55页 |
| ·免疫过程中卵囊产量变化 | 第55页 |
| ·盲肠病变计分 | 第55-56页 |
| ·结果 | 第56-59页 |
| ·免疫增重情况 | 第56页 |
| ·卵囊产量 | 第56-57页 |
| ·盲肠病变计分 | 第57页 |
| ·讨论 | 第57-59页 |
| 第六章 全文总结 | 第59-60页 |
| 参考文献 | 第60-66页 |
| 致谢 | 第66-67页 |
| 作者简介 | 第67页 |
