| 摘要 | 第1-4页 |
| Abstract | 第4-5页 |
| 目录 | 第5-7页 |
| 第一章 绪论 | 第7-13页 |
| ·人甲状旁腺激素 | 第7-9页 |
| ·概述 | 第7页 |
| ·构效关系 | 第7-8页 |
| ·生理作用 | 第8页 |
| ·hPTH 在骨质疏松症治疗中的应用 | 第8-9页 |
| ·融合蛋白的研究 | 第9-10页 |
| ·小分子蛋白药物 | 第9页 |
| ·重组蛋白药物半衰期的延长机制 | 第9页 |
| ·人血清白蛋白 | 第9-10页 |
| ·外源蛋白在酵母系统中的表达 | 第10-11页 |
| ·常用的酵母表达系统 | 第10页 |
| ·影响外源蛋白表达的因素 | 第10-11页 |
| ·酵母表达体系中存在的问题 | 第11页 |
| ·立题意义及研究内容 | 第11-13页 |
| ·立题意义 | 第11-12页 |
| ·研究内容 | 第12-13页 |
| 第二章 材料与方法 | 第13-21页 |
| ·材料 | 第13-15页 |
| ·菌株与质粒 | 第13页 |
| ·工具酶和试剂 | 第13页 |
| ·培养基 | 第13-14页 |
| ·主要仪器 | 第14页 |
| ·主要试剂配制 | 第14-15页 |
| ·实验方法 | 第15-21页 |
| ·质粒提取及大肠杆菌转化 | 第15页 |
| ·酿酒酵母基因组的提取 | 第15页 |
| ·扩增引物的设计和合成 | 第15-16页 |
| ·α-factor 和 hPTH(1-34)_(ab)-HSA 的扩增及 PCR 产物回收 | 第16页 |
| ·α-hPTH(1-34)_(ab)-HSA 基因的获得 | 第16-17页 |
| ·重组质粒的构建 | 第17页 |
| ·酿酒酵母感受态的制备及转化 | 第17-18页 |
| ·重组酿酒酵母转化子的筛选鉴定 | 第18页 |
| ·重组酿酒酵母菌表达 hPTH(1-34)_(ab)-HSA | 第18页 |
| ·重组毕赤酵母表达 hPTH(1-34)_(ab)-HSA | 第18页 |
| ·融合蛋白 hPTH(1-34)_(ab)-HSA 的检测方法 | 第18-19页 |
| ·融合蛋白 hPTH(1-34)_(ab)-HSA 的 Western blot 鉴定 | 第19页 |
| ·重组酿酒酵母表达 hPTH(1-34)_(ab)-HSA 的完整性分析 | 第19页 |
| ·重组酿酒酵母进行完整表达的 hPTH(1-34)_(ab)-HSA 的稳定性分析 | 第19-20页 |
| ·重组酿酒酵母的质粒稳定性分析 | 第20-21页 |
| 第三章 结果与讨论 | 第21-37页 |
| ·重组酿酒酵母的构建及表达 | 第21-26页 |
| ·α-hPTH(1-34)_(ab)-HSA 融合基因的获得 | 第21页 |
| ·重组质粒 pYX212-α-hPTH(1-34)_(ab)-HSA 构建 | 第21-22页 |
| ·重组质粒转化酿酒酵母及转化子的菌落 PCR 鉴定 | 第22-23页 |
| ·hPTH(1-34)_(ab)-HSA 在重组酿酒酵母的表达 | 第23-24页 |
| ·酿酒酵母表达 hPTH(1-34)_(ab)-HSA 的 Western blot 鉴定 | 第24页 |
| ·诱导型启动子 GAL1 对重组菌表达融合蛋白的影响 | 第24-26页 |
| ·酿酒酵母表达 hPTH(1-34)_(ab)-HSA 的完整和稳定性分析 | 第26-30页 |
| ·重组质粒 pYX212-α-HIS-hPTH(1-34)_(ab)-HSA 的构建 | 第26页 |
| ·酿酒酵母表达 hPTH(1-34)_(ab)-HSA 的完整性分析 | 第26-27页 |
| ·酿酒酵母表达完整融合蛋白的稳定性分析 | 第27-29页 |
| ·不同重组菌表达融合蛋白的比较 | 第29-30页 |
| ·重组菌发酵优化研究 | 第30-37页 |
| ·发酵培养基的选择 | 第30-31页 |
| ·发酵培养基优化 | 第31-32页 |
| ·重组菌发酵条件优化 | 第32-37页 |
| 主要结论与展望 | 第37-38页 |
| 主要结论 | 第37页 |
| 展望 | 第37-38页 |
| 致谢 | 第38-39页 |
| 参考文献 | 第39-43页 |
| 附录: 作者在攻读硕士学位期间发表的论文 | 第43页 |
