| 摘要 | 第1-6页 |
| ABSTRACT | 第6-9页 |
| 目录 | 第9-12页 |
| 第一章 前言 | 第12-29页 |
| 1 流感病毒的国内外研究概况 | 第12-22页 |
| ·流感病毒概述 | 第12页 |
| ·流感病毒结构及其功能 | 第12-17页 |
| ·流感病毒的增殖 | 第17-18页 |
| ·上市的流感病毒药物：M2 离子通道抑制剂、NA 抑制剂 | 第18-22页 |
| 2 酵母双杂交技术 | 第22-28页 |
| ·酵母双杂交技术的原理 | 第23-24页 |
| ·酵母双杂交技术的优缺点 | 第24-25页 |
| ·酵母双杂交技术的发展与衍伸 | 第25-28页 |
| 3 课题立题依据 | 第28-29页 |
| 第二章 基于流感病毒 RNA聚合酶亚基 PB1、PA的酵母双杂交体系的鉴定 | 第29-50页 |
| 1 实验仪器与材料 | 第29-32页 |
| ·实验仪器 | 第29-30页 |
| ·实验材料 | 第30-32页 |
| 2 实验方法 | 第32-41页 |
| ·PB1-PA 酵母双杂交体系 PCR 鉴定 | 第32-33页 |
| ·Western-blot 验证 PB1、PA 融合蛋白在酵母中的表达 | 第33-34页 |
| ·PB1、PA 基因克隆至哺乳动物表达载体 | 第34-36页 |
| ·GP2-293 细胞的体外培养 | 第36-37页 |
| ·无内毒素质粒的提取 | 第37-38页 |
| ·PB1、PA 基因重组质粒共转化人胚肾 GP2-293 细胞 | 第38页 |
| ·激光共聚焦验证 GFP-PB1 融合蛋白的存在位置 | 第38-39页 |
| ·Western-blot 验证 PB1-GFP 融合蛋白在 GP2-293 细胞中的表达 | 第39-40页 |
| ·免疫共沉淀（Co-IP）验证 PB1、PA 蛋白在哺乳动物细胞中的相互作用 | 第40-41页 |
| 3 实验结果 | 第41-50页 |
| ·PB1-PA 酵母双杂交体系接种培养结果 | 第41-42页 |
| ·PB1-PA 酵母双杂交体系 PCR 鉴定结果 | 第42-43页 |
| ·Western-blot 验证酵母细胞中融合蛋白表达结果 | 第43页 |
| ·用 AcGFP1 BD 及 PL 的 Forward 及 Reverse 进行 PCR 扩增流感病毒 PB1、PA基因结果 | 第43-44页 |
| ·重组质粒 PB1- pAcGFP1 和 PA-pProLabel 的双酶切分析鉴定结果 | 第44-45页 |
| ·荧光显微镜下观察 GFP 表达结果 | 第45-46页 |
| ·激光共聚焦验证 GFP-PB1 融合蛋白存在位置结果 | 第46页 |
| ·Western-blot 验证哺乳动物细胞中各 GFP 融合蛋白表达的结果 | 第46-47页 |
| ·ProLabel 融合蛋白的检测结果 | 第47-48页 |
| ·免疫共沉淀分析结果 | 第48-49页 |
| ·小结 | 第49-50页 |
| 第三章 应用构建成功的酵母双杂交体系进行靶向性抗流感病毒中药的筛选 | 第50-53页 |
| 1. 实验仪器与材料 | 第50页 |
| 2. 实验方法 | 第50-52页 |
| ·试剂配制 | 第50-51页 |
| ·应用酵母双杂交系统初步筛选抗流感病毒中药 | 第51-52页 |
| 3. 实验结果 | 第52-53页 |
| 第四章 讨论 | 第53-56页 |
| 1. PB1-PA 酵母双杂交体系中融合蛋白的表达结果讨论 | 第53-54页 |
| 2. PB1、PA 两蛋白在哺乳动物细胞 GP2-293 中的相互作用讨论 | 第54页 |
| 3. 酵母双杂交系统筛选靶点特异性药物讨论 | 第54-56页 |
| 第五章 结论与展望 | 第56-57页 |
| 1. 结论 | 第56页 |
| 2. 展望 | 第56-57页 |
| 参考文献 | 第57-63页 |
| 附录 | 第63-68页 |
| 硕士期间发表论文 | 第68-69页 |
| 致谢 | 第69页 |
