| 摘要 | 第1-5页 |
| ABSTRACT | 第5-9页 |
| 缩略语表 | 第9-11页 |
| 1 前言 | 第11-33页 |
| ·人凝血因子Ⅷ研究进展 | 第11-19页 |
| ·人凝血因子Ⅷ简介 | 第11-14页 |
| ·体内凝血机制 | 第14-15页 |
| ·血友病A 与凝血因子Ⅷ | 第15-16页 |
| ·血浆中人凝血因子Ⅷ的分离纯化 | 第16-17页 |
| ·重组人凝血因子Ⅷ国内外研究近况与应用前景 | 第17-19页 |
| ·存在的问题 | 第19页 |
| ·毕赤酵母表达系统研究进展 | 第19-32页 |
| ·毕赤酵母表达系统简介 | 第19-22页 |
| ·表达载体简介 | 第22-24页 |
| ·载体与基因组的整合 | 第24-27页 |
| ·外源蛋白的表达 | 第27-29页 |
| ·影响外源基因表达的因素及提高蛋白表达的途径 | 第29-32页 |
| ·展望 | 第32页 |
| ·论文新颖性 | 第32-33页 |
| 2 材料与方法 | 第33-51页 |
| ·材料 | 第33-36页 |
| ·主要实验材料 | 第33页 |
| ·主要试剂 | 第33-34页 |
| ·贮存液和培养基 | 第34-36页 |
| ·主要仪器设备 | 第36页 |
| ·实验方法 | 第36-51页 |
| ·人肝总RNA 的提取和反转录 | 第36-37页 |
| ·PCR 扩增目的基因 | 第37-39页 |
| ·FⅧ单段基因克隆载体的构建及鉴定 | 第39-41页 |
| ·FⅧ双段基因克隆载体的构建及鉴定 | 第41-43页 |
| ·FⅧ完整基因克隆载体的构建及鉴定 | 第43-44页 |
| ·重组表达质粒pPIC9-FⅧ的构建及鉴定 | 第44-45页 |
| ·毕赤酵母的转化 | 第45-46页 |
| ·基因组PCR 法鉴定阳性重组子 | 第46-48页 |
| ·MM 和MD 平板筛选His~+ Mut~+阳性克隆 | 第48页 |
| ·重组酵母菌的诱导表达 | 第48页 |
| ·SDS-PAGE 电泳 | 第48-51页 |
| 3 结果 | 第51-61页 |
| ·人肝总RNA 的提取和反转录 | 第51页 |
| ·人凝血因子Ⅷ基因的克隆及测序 | 第51-57页 |
| ·单段凝血因子Ⅷ基因的克隆及测序 | 第51-55页 |
| ·双段凝血因子Ⅷ基因的克隆及测序 | 第55-56页 |
| ·完整凝血因子Ⅷ基因的克隆及测序 | 第56-57页 |
| ·重组表达载体pPIC9-FⅧ的构建及鉴定 | 第57-58页 |
| ·重组质粒转入毕赤酵母后的验证 | 第58页 |
| ·MM 和MD 平板筛选His~+ Mut~+表型 | 第58-59页 |
| ·重组人凝血因子Ⅷ的诱导表达及SDS-PAGE 检测 | 第59-61页 |
| ·诱导时间对毕赤酵母表达重组人凝血因子Ⅷ的影响 | 第59页 |
| ·诱导温度对毕赤酵母表达重组人凝血因子Ⅷ的影响 | 第59-60页 |
| ·甲醇浓度及添加频率对毕赤酵母表达重组人凝血因子Ⅷ的影响 | 第60-61页 |
| 4 讨论 | 第61-65页 |
| 参考文献 | 第65-73页 |
| 总结与结论 | 第73-75页 |
| 攻读硕士学位期间参加的科研项目和发表论文 | 第75-77页 |
| 致谢 | 第77-78页 |
