| 摘要 | 第1-12页 |
| ABSTRACT | 第12-16页 |
| 缩略词表 | 第16-18页 |
| 前言 | 第18-20页 |
| 第一部分 文献综述 | 第20-56页 |
| 第一章 精子超活化和CatSper蛋白家族 | 第20-32页 |
| 1 精子超活化 | 第20-26页 |
| ·超活化概念 | 第20-21页 |
| ·超活化与活化、获能之间的关系 | 第21-22页 |
| ·精子超活化的运动特征 | 第22-24页 |
| ·精子超活化的调控机制 | 第24-26页 |
| 2 CatSper蛋白家族 | 第26-32页 |
| ·CatSper蛋白家族 | 第26-28页 |
| ·CatSper蛋白家族功能 | 第28-32页 |
| 第二章 Ca~(2+)通道：未来避孕药物的新靶标 | 第32-34页 |
| 第三章 信号转导通路研究方法和策略 | 第34-56页 |
| 1 RNAi技术 | 第34-38页 |
| ·RNA干涉 | 第34-35页 |
| ·RNAi的作用机制 | 第35-36页 |
| ·作用特点 | 第36-37页 |
| ·RNAi的应用 | 第37-38页 |
| 2 病毒侵染与活体电穿孔转染 | 第38-56页 |
| ·慢病毒侵染 | 第38-43页 |
| ·活体电穿孔转染 | 第43-47页 |
| ·活体电穿孔转染原理和特点 | 第43-44页 |
| ·体内电穿孔法转染操作需要旳条件 | 第44-46页 |
| ·体内电穿孔法在机体发育过程中基因表达研究上的应用 | 第46页 |
| ·体内电穿孔法与基因治疗 | 第46-47页 |
| 参考文献 | 第47-56页 |
| 第二部分 试验研究 | 第56-140页 |
| 第一章 siRNA构建和精子体外转染 | 第56-78页 |
| 1 材料与方法 | 第56-66页 |
| ·试验材料 | 第56-59页 |
| ·试验方法 | 第59-65页 |
| ·统计分析 | 第65-66页 |
| 3 结果与分析 | 第66-71页 |
| ·最佳的电转条件和效果 | 第66-67页 |
| ·CatSper2干涉效率 | 第67-68页 |
| ·CatSper2表达量降低减少精子胞外Ca~(2+)峰进入胞内 | 第68-70页 |
| ·胞内Ca~(2+)足以触发精子超活化过程,但胞外Ca~(2+)峰是其得以维持的必要条件 | 第70-71页 |
| 4 讨论 | 第71-72页 |
| 5 小结 | 第72-73页 |
| 参考文献 | 第73-78页 |
| 第二章 CatSper2质粒载体和病毒载体构建与分析 | 第78-98页 |
| 1 材料与方法 | 第78-79页 |
| ·主要试剂 | 第78-79页 |
| ·试验仪器和器材 | 第79页 |
| ·主要溶液配制 | 第79页 |
| 2 试验方法 | 第79-90页 |
| ·pGPU6/GFP/Neo-CatSper2质粒构建 | 第79-82页 |
| ·shRNAs表达模板的复性 | 第82-86页 |
| ·慢病毒载体构建与病毒包装 | 第86-90页 |
| 3 结果与分析 | 第90-93页 |
| ·成功构建pGPU6/GFP/Neo-CatSper2质粒 | 第90-91页 |
| ·pLenti/H1/siCatSper2-785干涉载体的构建 | 第91-93页 |
| 4 讨论 | 第93-94页 |
| 5 小结 | 第94-95页 |
| 参考文献 | 第95-98页 |
| 第三章 CatSper2质粒载体和病毒载体活体转染 | 第98-120页 |
| 1 材料和方法 | 第98-99页 |
| ·试验动物 | 第98页 |
| ·试验试剂和溶液 | 第98-99页 |
| ·试验器材 | 第99页 |
| 2 质粒载体转染方法 | 第99-104页 |
| ·试验动物分组和术前准备 | 第99页 |
| ·最佳活体电转条件和剂量筛选 | 第99-101页 |
| ·最佳病毒载体注射剂量优化 | 第101-102页 |
| ·重组质粒载体和病毒载体对睾丸和附睾精子的转染效率 | 第102页 |
| ·质粒转染和病毒转染对CatSper2基因表达敲减效率检测 | 第102-103页 |
| ·活体转染后大鼠附睾精子CASA分析 | 第103-104页 |
| ·统计分析 | 第104页 |
| 4 结果与分析 | 第104-114页 |
| ·最佳活体转染条件和最佳干涉序列 | 第104-107页 |
| ·质粒载体对CatSper2表达的敲减效率 | 第107-109页 |
| ·质粒载体转染大鼠睾丸对附睾精子超活化的影响 | 第109-110页 |
| ·最佳病毒注射剂量和转染效果 | 第110-111页 |
| ·病毒载体转染后CatSper2敲减效率 | 第111-113页 |
| ·病毒载体转染大鼠睾丸对精子的影响 | 第113-114页 |
| 5 讨论 | 第114-115页 |
| 6 小结 | 第115-117页 |
| 参考文献 | 第117-120页 |
| 第四章 阻断超活化对雄性大鼠精子受精能力的影响 | 第120-140页 |
| 1 材料和方法 | 第120-121页 |
| ·试验动物 | 第120页 |
| ·试验试剂和溶液 | 第120页 |
| ·试验器材 | 第120-121页 |
| 2 质粒载体和病毒载体转染大鼠睾丸 | 第121-126页 |
| ·试验动物分组和术前准备 | 第121页 |
| ·CatSper2敲减对精子胞内Ca~(2+)调控 | 第121-122页 |
| ·CatSper2低表达精子受精能力实验 | 第122-124页 |
| ·精子在粘稠性培养液中迁移率实验 | 第124页 |
| ·睾丸组化分析 | 第124-125页 |
| ·精子存活时间和活力分析 | 第125-126页 |
| ·统计分析 | 第126页 |
| 3 结果与分析 | 第126-133页 |
| ·CatSper2低表达对大鼠精子胞内Ca~(2+)峰调节 | 第126-128页 |
| ·精子超活化信号通路被阻断后大鼠精子受精能力的影响 | 第128-130页 |
| ·精子粘滞性溶液中迁移率和体外存活能力分析 | 第130-131页 |
| ·睾丸网微注射和活体电转对大鼠睾丸功能、精子发生和精子存活能力等的影响 | 第131-133页 |
| ·质粒睾丸网微注射结合活体电转染方法和睾丸微注射病毒转染分析比较 | 第133页 |
| 4 讨论 | 第133-136页 |
| ·CatSper2表达的敲减阻断了胞外Ca~(2+) | 第134-135页 |
| ·去除透明带的卵母细胞纠正了处理组精子不能受精卵母细胞的缺陷 | 第135页 |
| ·质粒和病毒转染没有对大鼠睾丸功能和精子本身产生显著影响 | 第135-136页 |
| ·质粒载体结合活体电转能够成为一种可靠转染方法 | 第136页 |
| 5 小结 | 第136-137页 |
| 参考文献 | 第137-140页 |
| 全文结论 | 第140-142页 |
| 创新点 | 第142-144页 |
| 存在的问题和展望 | 第144-146页 |
| 攻读博士学位期间发表论文 | 第146-148页 |
| 致谢 | 第148页 |
