| 摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-8页 |
| 缩略语 | 第8-12页 |
| 第一章 引言 | 第12-21页 |
| ·昆虫天然免疫识别机制 | 第12-15页 |
| ·体液免疫 | 第12-13页 |
| ·细胞免疫 | 第13-15页 |
| ·家蚕的免疫研究进展 | 第15-17页 |
| ·家蚕免疫抵御系统的研究 | 第15-16页 |
| ·家蚕抗菌肽的研究进展 | 第16页 |
| ·以基因组为基础的家蚕免疫研究 | 第16-17页 |
| ·昆虫中 Hemolin 的研究进展 | 第17-18页 |
| ·Hemolin 的基因结构及其蛋白结构 | 第17-18页 |
| ·Hemolin 蛋白的功能研究进展 | 第18页 |
| ·实验方案设计 | 第18-21页 |
| ·本实验研究的目的及意义 | 第18-19页 |
| ·研究内容 | 第19-20页 |
| ·技术路线 | 第20-21页 |
| 第二章 家蚕天然免疫蛋白 Hemolin 的分离纯化 | 第21-29页 |
| ·材料与试剂 | 第21-22页 |
| ·材料 | 第21页 |
| ·试剂 | 第21页 |
| ·试剂的配制 | 第21-22页 |
| ·实验方法 | 第22-24页 |
| ·获得含目的蛋白的溶液 | 第22页 |
| ·分离纯化天然 Hemolin | 第22-23页 |
| ·质谱鉴定 | 第23页 |
| ·凝胶过滤层析分离 | 第23-24页 |
| ·结果 | 第24-28页 |
| ·离子交换层析分离图谱及 SDS-PAGE 检测 | 第24页 |
| ·凝胶过滤层析分离图谱及 SDS-PAGE 检测 | 第24-25页 |
| ·质谱鉴定结果 | 第25-27页 |
| ·进一步分离目的蛋白 | 第27-28页 |
| ·讨论 | 第28-29页 |
| 第三章 Hemolin 基因的生物信息学分析 | 第29-34页 |
| ·序列与工具 | 第29页 |
| ·序列 | 第29页 |
| ·生物信息学工具 | 第29页 |
| ·生物信息学分析结果 | 第29-33页 |
| ·Hemolin 基因序列比对 | 第29-30页 |
| ·信号肽分析 | 第30-31页 |
| ·疏水性分析 | 第31页 |
| ·跨膜区分析 | 第31页 |
| ·Hemolin 蛋白高级结构的预测 | 第31-32页 |
| ·Hemolin 蛋白氨基酸序列的同源性分析 | 第32-33页 |
| ·讨论 | 第33-34页 |
| 第四章 抗体偶联亲和层析柱纯化天然 Hemolin 及其功能的研究 | 第34-51页 |
| ·材料与试剂 | 第34-35页 |
| ·材料 | 第34页 |
| ·试剂 | 第34页 |
| ·试剂配制 | 第34-35页 |
| ·方法 | 第35-42页 |
| ·重组质粒 Hemolin 的构建 | 第35-38页 |
| ·融合蛋白 His-Hemolin 的纯化 | 第38页 |
| ·Hemolin 多克隆抗体的制备及亲和层析柱的制备和使用 | 第38-40页 |
| ·天然 Hemolin 抑菌试验 | 第40-41页 |
| ·GST Pull-Down | 第41页 |
| ·荧光定量 PCR 分析 | 第41-42页 |
| ·结果 | 第42-49页 |
| ·Hemolin 基因的 PCR 扩增 | 第42-43页 |
| ·原核表达载体的构建与鉴定 | 第43页 |
| ·融合蛋白的表达 | 第43-44页 |
| ·His-Hemolin 融合蛋白的纯化 | 第44-45页 |
| ·融合蛋白的进一步纯化 | 第45页 |
| ·初步纯化多克隆抗体及 Hemolin 蛋白抗体的效价测定 | 第45页 |
| ·Western blot 检测抗体的特异性 | 第45-46页 |
| ·抗原偶联效率的测定 | 第46页 |
| ·抗体的再纯化 | 第46-47页 |
| ·抗体的偶联效率测定 | 第47页 |
| ·利用抗体偶联亲和层析柱 His-Hemolin 和天然 Hemolin | 第47页 |
| ·天然 Hemolin 抑菌试验 | 第47-48页 |
| ·GST Pull-Down 鉴定结果 | 第48页 |
| ·荧光定量 PCR | 第48-49页 |
| ·讨论 | 第49-51页 |
| 第五章 Hemolin 蛋白结晶的初步探索 | 第51-57页 |
| ·材料和试剂 | 第51页 |
| ·材料 | 第51页 |
| ·试剂 | 第51页 |
| ·方法 | 第51-52页 |
| ·重组表达质粒 pET-28a-MnSOD-Hem 构建及鉴定 | 第51页 |
| ·融合蛋白 His-MnSOD-Hem 的表达及纯化 | 第51页 |
| ·点晶步骤 | 第51-52页 |
| ·结果 | 第52-55页 |
| ·pET-28a-MnSOD-Hem 载体的构建与鉴定 | 第52页 |
| ·融合蛋白 His-MnSOD-Hem 的表达 | 第52-53页 |
| ·融合蛋白 His-MnSOD-Hem 的初步纯化 | 第53页 |
| ·融合蛋白 His-MnSOD-Hem 的进一步纯化 | 第53-54页 |
| ·晶体初探 | 第54-55页 |
| ·讨论 | 第55-57页 |
| 结论 | 第57-58页 |
| 参考文献 | 第58-62页 |
| 致谢 | 第62页 |
