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鹅TLR3和TLR5基因的克隆及其功能研究

摘要第1-5页
Abstract第5-11页
1 引言第11-18页
   ·天然免疫及 Toll 样受体家族基因第12-14页
     ·天然免疫与获得性免疫第12页
     ·Toll 样受体家族第12-14页
   ·家禽 TLRs 研究进展第14-17页
     ·TLR1 亚科第14-15页
     ·TLR2 亚科第15页
     ·TLR3第15-16页
     ·TLR4第16页
     ·TLR5第16-17页
     ·TLR7第17页
     ·TLR9第17页
     ·TLR15第17页
   ·研究展望第17-18页
2 鹅 TLR3 基因的克隆、生物信息学分析及组织表达谱研究第18-37页
   ·材料与方法第18-22页
     ·试验材料和仪器第18-19页
     ·总 RNA 的提取及质量检测第19页
     ·第一链的合成第19-20页
     ·鹅 TLR3 基因全长的克隆第20-21页
     ·鹅 TLR3 cDNA 全长序列的分析第21-22页
     ·荧光定量 PCR 反应第22页
     ·数据统计分析第22页
   ·结果与分析第22-34页
     ·RNA 样品的制备与鉴定第22页
     ·鹅 TLR3 基因全长的克隆第22-23页
     ·鹅 TLR3 同源性分析第23-24页
     ·鹅 TLR3 基因生物信息学分析第24-30页
     ·TLR3 的组织表达谱第30-34页
   ·讨论第34-36页
   ·小结第36-37页
3 鹅 TLR5 基因的克隆、生物信息学分析及组织表达谱研究第37-51页
   ·材料与方法第37-38页
     ·试验材料第37页
     ·总 RNA 的提取及质量检测第37页
     ·第一条链的合成第37页
     ·鹅 TLR5 基因全长的克隆第37页
     ·鹅 TLR5 cDNA 全长序列的分析第37页
     ·TLR5 的组织表达谱第37-38页
     ·数据统计分析第38页
   ·结果与分析第38-49页
     ·RNA 样品的质量鉴定第38页
     ·TLR5 基因全长的克隆第38-39页
     ·TLR5 同源性分析第39-40页
     ·TLR5 生物信息学分析第40-45页
     ·TLR5 的组织表达谱第45-49页
   ·讨论第49-50页
   ·小结第50-51页
4 鹅 TLR3、TLR5 的功能研究第51-58页
   ·材料与方法第51-53页
     ·主要试剂和仪器第51页
     ·真核表达载体的构建第51-52页
     ·细胞培养第52页
     ·瞬时转染第52页
     ·重组蛋白的真核表达第52-53页
     ·荧光素酶活性检测第53页
     ·数据统计分析第53页
   ·结果与分析第53-56页
     ·真核表达载体的构建第53页
     ·鹅 TLR3、TLR5 在 HEK-293T 细胞中的真核表达第53-54页
     ·鹅 TLR3、TLR5 的激活对 NF-κB 活性的影响第54-56页
   ·讨论第56-57页
   ·小结第57-58页
5 鹅 TLRs 在外周血单核淋巴细胞抗感染免疫中的作用研究第58-68页
   ·材料与方法第58-60页
     ·主要材料与仪器第58页
     ·鹅外周血单核淋巴细胞的分离培养第58页
     ·细菌培养第58-59页
     ·试验设计第59页
     ·总 RNA 提取及 cDNA 的合成第59页
     ·实时荧光定量 PCR第59页
     ·统计学分析第59-60页
   ·结果与分析第60-65页
     ·外周血单核淋巴细胞总 RNA 的提取第60页
     ·引物特异性和扩增效率的检测第60-61页
     ·标准曲线第61页
     ·目的基因的溶解溶解曲线第61页
     ·禽流感感染对外周血单核细胞中 TLR3 及其下游炎性因子的影响第61-62页
     ·Poly i:c 刺激对外周血单核细胞中 TLR3 及其下游炎性因子的影响第62-63页
     ·沙门氏菌感染对外周血单核细胞中 TLR5 及其下游炎性因子的影响第63-64页
     ·Flagellin 刺激对外周血单核细胞中 TLR5 及其下游炎性因子的影响第64-65页
   ·讨论第65-67页
   ·小结第67-68页
6 结论第68-69页
参考文献第69-77页
致谢第77-78页
作者简介第78-79页
导师简介第79页

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