| 摘要 | 第1-4页 |
| Abstract | 第4-6页 |
| 目录 | 第6-8页 |
| 第一章 绪论 | 第8-14页 |
| ·黑曲霉α-葡萄糖苷酶概述 | 第8-10页 |
| ·黑曲霉α-葡萄糖苷酶的来源以及催化机制 | 第8页 |
| ·黑曲霉α-葡萄糖苷酶的应用 | 第8-9页 |
| ·黑曲霉α-葡萄糖苷酶的研究概况 | 第9-10页 |
| ·毕赤酵母表达系统 | 第10-11页 |
| ·毕赤酵母表达系统简介 | 第10页 |
| ·毕赤酵母发酵优化策略 | 第10-11页 |
| ·毕赤酵母共表达伴侣蛋白策略 | 第11页 |
| ·密码子优化策略 | 第11-12页 |
| ·密码子偏爱性的存在原因及其影响异源蛋白表达的机理 | 第11-12页 |
| ·基于密码子偏爱性提高异源蛋白表达量的方法 | 第12页 |
| ·立题依据及意义 | 第12-13页 |
| ·本论文主要研究内容 | 第13-14页 |
| 第二章 实验材料与方法 | 第14-22页 |
| ·材料 | 第14-15页 |
| ·菌种与质粒 | 第14页 |
| ·主要试剂 | 第14页 |
| ·主要仪器 | 第14页 |
| ·培养基 | 第14-15页 |
| ·培养方法 | 第15-16页 |
| ·大肠杆菌的培养 | 第15页 |
| ·重组毕赤酵母的摇瓶培养和诱导产酶 | 第15页 |
| ·重组毕赤酵母的 3L 罐培养 | 第15-16页 |
| ·分子生物学操作 | 第16-20页 |
| ·毕赤酵母基因组的提取 | 第16页 |
| ·PCR 扩增二硫键异构酶基因 | 第16页 |
| ·重组质粒 pPICZ A-pdi 构建 | 第16-17页 |
| ·化转大肠杆菌感受态细胞 | 第17页 |
| ·重组质粒的筛选与鉴定 | 第17页 |
| ·P.pastoris KM71/pPIC9K-aglu 感受态细胞的制备 | 第17-18页 |
| ·重组 P. pastoris KM71/pPIC9K-aglu/pPICZ A-pdi 的构建与筛选 | 第18页 |
| ·黑曲霉α-葡萄糖苷酶原始基因分析及优化设计 | 第18-19页 |
| ·PCR 扩增 aglu~（OP）基因 | 第19页 |
| ·重组表达载体 pPIC9K-aglu~（OP）构建 | 第19页 |
| ·化转大肠杆菌感受态细胞 | 第19页 |
| ·重组质粒 pPIC9K-aglu~（OP）的筛选与鉴定 | 第19-20页 |
| ·重组 P. pastoris KM71/pPIC9K-aglu~（OP）的构建与筛选 | 第20页 |
| ·分析方法 | 第20-22页 |
| ·毕赤酵母细胞浓度测定 | 第20页 |
| ·毕赤酵母细胞干重测定 | 第20页 |
| ·蛋白含量测定 | 第20页 |
| ·α-葡萄糖苷酶 pNPG 水解酶活力的测定方法 | 第20-21页 |
| ·毕赤酵母 AOX 酶活测定[55, 56] | 第21-22页 |
| 第三章 结果与讨论 | 第22-42页 |
| ·重组 P. pastoris KM71/pPIC9K-aglu 的 3L 罐发酵生产α -葡萄糖苷酶的研究 | 第22-28页 |
| ·初始诱导菌体浓度对α-葡萄糖苷酶表达量的影响 | 第22-23页 |
| ·诱导温度控制对 AGL 产量的影响 | 第23-25页 |
| ·诱导阶段维持甲醇浓度对 AGL 产量的影响 | 第25-27页 |
| ·诱导 pH 控制对 AGL 产量的影响 | 第27-28页 |
| ·毕赤酵母二硫键异构酶基因的克隆及其共表达 | 第28-33页 |
| ·毕赤酵母基因组的提取 | 第29页 |
| ·PCR 扩增 pdi 基因以及重组表达载体 pPICZ A-pdi 的构建 | 第29-30页 |
| ·重组 P. pastoris KM71/pPIC9K-aglu/pPICZ A-pdi 的构建和筛选 | 第30页 |
| ·重组二硫键异构酶的表达验证 | 第30-32页 |
| ·重组 P. pastoris KM71/pPIC9K-aglu/pPICZ A-pdi 的 3L 罐放大培养 | 第32-33页 |
| ·黑曲霉α-葡萄糖苷酶基因的密码子优化 | 第33-42页 |
| ·α-葡萄糖苷酶基因的密码子优化 | 第33-36页 |
| ·重组表达质粒 pPIC9K-aglu~（OP）的构建 | 第36-37页 |
| ·重组 P. pastoris KM71/pPIC9K-aglu~（OP）的构建和筛选 | 第37页 |
| ·重组 P. pastoris KM71/pPIC9K-aglu~（OP）的摇瓶诱导表达 | 第37-38页 |
| ·重组 P. pastoris KM71/pPIC9K-aglu~（OP）的 3L 罐发酵 | 第38-39页 |
| ·化学添加剂对黑曲霉α -葡萄糖苷酶贮存稳定性的影响 | 第39-42页 |
| 主要结论与展望 | 第42-44页 |
| 主要结论 | 第42页 |
| 展望 | 第42-44页 |
| 致谢 | 第44-45页 |
| 参考文献 | 第45-50页 |
| 附录：作者在攻读硕士学位期间发表的论文 | 第50页 |
