| 目录 | 第1-10页 |
| 缩略词 | 第10-12页 |
| 中文摘要 | 第12-15页 |
| Abstract | 第15-19页 |
| 引言 | 第19-20页 |
| 第一章 文献综述 | 第20-47页 |
| 第一节 木聚糖的来源与结构 | 第20-22页 |
| 第二节 木聚糖酶 | 第22-29页 |
| 1 木聚糖酶的种类 | 第22-23页 |
| 2 木聚糖酶的结构 | 第23-27页 |
| ·催化结构域 | 第24-25页 |
| ·碳水化合物结合域 | 第25-26页 |
| ·连接肽 | 第26页 |
| ·热稳定性结构域 | 第26-27页 |
| ·重复序列 | 第27页 |
| 3 木聚糖酶的催化机制 | 第27-29页 |
| 第三节 木聚糖酶的应用 | 第29-33页 |
| 1 木聚糖酶在畜牧行业中的应用 | 第29-31页 |
| ·在单胃动物上的应用 | 第30页 |
| ·在反刍动物上的应用 | 第30-31页 |
| ·在水产动物上的应用 | 第31页 |
| 2 木聚糖酶在制浆造纸工业中的应用 | 第31-32页 |
| 3 木聚糖酶在食品中的应用 | 第32-33页 |
| ·在焙烤工业中的应用 | 第32页 |
| ·在生产功能性低聚木糖的应用 | 第32-33页 |
| 第四节 木聚糖酶的分子改良 | 第33-41页 |
| 1 理性设计 | 第34-35页 |
| 2 非理性设计 | 第35-41页 |
| ·突变文库的构建 | 第36-39页 |
| ·突变文库的筛选 | 第39-41页 |
| 第五节 木聚糖酶的高效表达策略 | 第41-45页 |
| 1 外源基因表达系统 | 第41-42页 |
| 2 启动子 | 第42-43页 |
| 3 基因拷贝数 | 第43页 |
| 4 信号肽 | 第43-44页 |
| 5 发酵参数优化 | 第44-45页 |
| 第六节 本研究的目的、意义和主要研究内容 | 第45-47页 |
| 1 本研究的目的和意义 | 第45页 |
| 2 研究内容 | 第45-47页 |
| 第二章 内切木聚糖酶与木糖苷酶基因的克隆及原核表达 | 第47-67页 |
| 1 材料与方法 | 第47-59页 |
| ·试验材料 | 第47-50页 |
| ·主要仪器 | 第50页 |
| ·试验方法 | 第50-59页 |
| 2 试验结果 | 第59-64页 |
| ·内切木聚糖酶和木糖苷酶基因的扩增 | 第59-60页 |
| ·重组表达质粒的鉴定 | 第60页 |
| ·原核表达木聚糖酶和木糖苷酶的纯化及SDS-PAGE分析 | 第60-62页 |
| ·原核表达木聚糖酶和木糖苷酶的活性及酶学特性分析 | 第62-63页 |
| ·木聚糖酶的抗抑制特性分析 | 第63-64页 |
| ·木聚糖酶的进化树分析 | 第64页 |
| 3 讨论 | 第64-67页 |
| 第三章 木聚糖酶基因atx的分子改良及重组酵母工程菌的构建 | 第67-85页 |
| 1 材料与方法 | 第67-75页 |
| ·试验材料 | 第67-69页 |
| ·主要仪器 | 第69页 |
| ·试验方法 | 第69-75页 |
| 2 试验结果 | 第75-82页 |
| ·高活性木聚糖酶突变体的筛选 | 第75-76页 |
| ·重组酵母表达载体的构建 | 第76-77页 |
| ·重组酵母表达宿主的构建 | 第77页 |
| ·木聚糖酶基因atx及突变体基因FSI-A124在毕赤酵母中的表达 | 第77-78页 |
| ·木聚糖酶蛋白的纯化和去糖基化分析 | 第78-79页 |
| ·突变酶YFSI-124的酶学特性分析 | 第79-80页 |
| ·野生酶及突变酶的动力学分析 | 第80页 |
| ·野生酶及突变酶的序列和结构分析 | 第80-82页 |
| 3 讨论 | 第82-85页 |
| 第四章 木聚糖酶基因tfx的分子改良及双拷贝重组酵母工程菌的构建 | 第85-112页 |
| 1 材料与方法 | 第85-94页 |
| ·试验材料 | 第85-86页 |
| ·主要仪器 | 第86-87页 |
| ·试验方法 | 第87-94页 |
| 2 试验结果 | 第94-109页 |
| ·木聚糖酶基因tfx的分子改良 | 第94-103页 |
| ·构建包含多拷贝突变体基因的酵母表达宿主 | 第103-107页 |
| ·两拷贝重组毕赤酵母分泌表达G4SM1 | 第107-109页 |
| 3 讨论 | 第109-112页 |
| 第五章 共表达高拷贝木聚糖酶G4SM1催化区和木糖苷酶的重组酵母工程菌的构建 | 第112-137页 |
| 1 材料与方法 | 第112-122页 |
| ·试验材料 | 第112-113页 |
| ·主要仪器 | 第113页 |
| ·试验方法 | 第113-122页 |
| 2 试验结果 | 第122-133页 |
| ·碳水化合物结合域的粘附能力研究 | 第122-123页 |
| ·单拷贝表达载体的构建 | 第123-125页 |
| ·A540T点突变 | 第125页 |
| ·构建包含四拷贝G4SM1催化结构域的表达载体 | 第125-126页 |
| ·构建共表达四拷贝内切木聚糖酶和木糖苷酶的表达载体 | 第126-127页 |
| ·重组酵母工程菌的鉴定 | 第127-130页 |
| ·重组酵母菌株分泌表达外源蛋白 | 第130-131页 |
| ·木聚糖酶的水解特性分析 | 第131-132页 |
| ·傅里叶变换红外光谱分析 | 第132页 |
| ·底物表面形态分析 | 第132-133页 |
| 3 讨论 | 第133-137页 |
| 第六章 小结、创新点和后续研究展望 | 第137-139页 |
| 1 小结 | 第137页 |
| 2 创新点 | 第137-138页 |
| 3 后续研究展望 | 第138-139页 |
| 参考文献 | 第139-152页 |
| 附录一 pUCm-T vector | 第152-153页 |
| 附录二 pET-30a(+) vector | 第153-154页 |
| 附录三 pET-22b(+) vector | 第154-155页 |
| 附录四 pGAPZaA vector | 第155-156页 |
| 附录五 pPICZaA vector | 第156-157页 |
| 作者简介及主要发表论文 | 第157-158页 |
| 致谢 | 第158页 |
