| 摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-7页 |
| 本论文的缩写词表 | 第7-9页 |
| 第一章 绪论 | 第9-17页 |
| ·糖蛋白的介绍 | 第9-12页 |
| ·糖蛋白概念 | 第9页 |
| ·糖蛋白的分类与其结构 | 第9-11页 |
| ·研究糖蛋白的方法和意义 | 第11-12页 |
| ·脱糖基化酶 | 第12-15页 |
| ·来自于原核生物的PNGase F | 第12页 |
| ·来自于真核生物的Png1p | 第12-14页 |
| ·来自酵母糖酰胺酶改造体Png1p-AH1 | 第14-15页 |
| ·脱糖基化方法概述 | 第15-16页 |
| ·本研究的内容、目的和意义 | 第16-17页 |
| 第二章 Png1p-ΔH1表达纯化及其酶学性质 | 第17-24页 |
| ·实验材料 | 第17-19页 |
| ·实验所用到的基因、载体和菌株 | 第17页 |
| ·仪器与设备 | 第17页 |
| ·试剂盒与工具酶 | 第17页 |
| ·培养基与相关溶液配制 | 第17-19页 |
| ·实验方法 | 第19-22页 |
| ·Png1p-ΔH1的构建 | 第19-20页 |
| ·Png1p-ΔH1重组载体的构建 | 第20页 |
| ·大肠杆菌(DE3)BL21/Png1p-ΔH1重组菌的分离与鉴定 | 第20-21页 |
| ·目的蛋白的大量表达 | 第21页 |
| ·糖酰胺酶的纯化 | 第21页 |
| ·酶学性质鉴定 | 第21-22页 |
| ·结果与讨论 | 第22-24页 |
| ·糖酰胺酶的表达与纯化 | 第22-23页 |
| ·酶活性测定 | 第23-24页 |
| 第三章 高效脱糖基化方法的构建 | 第24-30页 |
| ·实验材料 | 第24页 |
| ·仪器与设备 | 第24页 |
| ·酶与生化试剂 | 第24页 |
| ·相关溶液及配制 | 第24页 |
| ·实验方法 | 第24-26页 |
| ·Png1p-ΔH1的高效脱糖基化反应 | 第24-25页 |
| ·底物糖蛋白复性及其活性检测 | 第25页 |
| ·圆二色光谱检测 | 第25-26页 |
| ·利用不同底物CPY进行验证 | 第26页 |
| ·结果与讨论 | 第26-30页 |
| ·开发新的方法来释放N-glycans生成天然脱糖基化的蛋白质 | 第26-29页 |
| ·CPY为底物的脱糖基化应用 | 第29-30页 |
| 总结 | 第30-31页 |
| 参考文献 | 第31-35页 |
| 致谢 | 第35-36页 |
| 攻读硕士学位期间发表的学术论文 | 第36页 |