| 缩略词表 | 第1-4页 |
| 中文摘要 | 第4-6页 |
| ABSTRACT | 第6-11页 |
| 第一章 文献综述及选题的目的和意义 | 第11-24页 |
| 1. 大熊猫及犬瘟热的研究概况 | 第11-13页 |
| ·大熊猫现状研究进展 | 第11页 |
| ·犬瘟热病毒及其疫苗研究概况 | 第11-13页 |
| 2. 细胞因子研究进展 | 第13-21页 |
| ·白细胞介素2的研究概况 | 第13-17页 |
| ·白介素2的产生 | 第14页 |
| ·白介素2的结构及理化性质 | 第14-15页 |
| ·白介素2受体及信号转导机制 | 第15页 |
| ·白介素2的生物学活性 | 第15-16页 |
| ·白介素2在畜禽中的应用 | 第16-17页 |
| ·白细胞介素6研究概况 | 第17-21页 |
| ·白细胞介素6的产生 | 第18页 |
| ·白细胞介素6的结构及理化性质 | 第18页 |
| ·白介素6受体及信号转导机制 | 第18-19页 |
| ·白介素6的生物学活性 | 第19-20页 |
| ·白介素6在畜禽上的应用 | 第20-21页 |
| ·IL-2与IL-6在细胞因子网络中的相互关系 | 第21页 |
| 3. 细胞因子融合基因研究概况 | 第21-22页 |
| 4. 研究的目的与意义 | 第22-24页 |
| 第二章 大熊猫IL-2和IL-6全基因克隆及生物信息学分析 | 第24-43页 |
| 1. 实验材料 | 第24-26页 |
| ·载体和菌株 | 第24页 |
| ·实验动物 | 第24页 |
| ·主要试剂及试剂的配制 | 第24-25页 |
| ·主要仪器 | 第25-26页 |
| ·实验数据 | 第26页 |
| 2. 实验方法 | 第26-31页 |
| ·大熊猫外周血淋巴细胞体外培养 | 第26-27页 |
| ·总RNA提取 | 第27页 |
| ·cDNA的合成 | 第27页 |
| ·引物的设计与合成 | 第27-28页 |
| ·目的基因的PCR扩增 | 第28页 |
| ·目的基因PCR产物的TA克隆 | 第28-30页 |
| ·目的片段的回收 | 第28-29页 |
| ·目的片段与克隆载体连接 | 第29页 |
| ·DH5α感受态细胞的制备 | 第29-30页 |
| ·连接产物的转化 | 第30页 |
| ·重组质粒的初步鉴定 | 第30-31页 |
| ·重组质粒的小量提取 | 第30页 |
| ·重组质粒双酶切鉴定 | 第30-31页 |
| ·核苷酸序列的测定 | 第31页 |
| ·克隆序列的GenBank登录 | 第31页 |
| ·目的基因的生物信息学分析 | 第31页 |
| ·基本信息分析 | 第31页 |
| ·氨基酸相似性及系统进化分析 | 第31页 |
| ·密码子的偏嗜性分析 | 第31页 |
| 3. 结果与分析 | 第31-41页 |
| ·IL-2,IL-6基因的PCR扩增 | 第31-32页 |
| ·IL-2,IL-6基因TA克隆质粒鉴定 | 第32页 |
| ·GenBank登录 | 第32-33页 |
| ·IL-2的生物信息学分析 | 第33-36页 |
| ·基本信息分析 | 第33-34页 |
| ·同源性分析 | 第34-35页 |
| ·偏嗜性分析 | 第35-36页 |
| ·IL-6的生物信息学分析 | 第36-41页 |
| ·基本信息分析 | 第36-38页 |
| ·同源性分析 | 第38-39页 |
| ·偏嗜性分析 | 第39-41页 |
| 4. 讨论 | 第41-43页 |
| 第三章 大熊猫白介素2、6及其融合蛋白的原核表达、多克隆抗体的制备 | 第43-58页 |
| 1. 实验材料 | 第43-45页 |
| ·载体和菌株 | 第43页 |
| ·实验动物 | 第43-44页 |
| ·主要试剂及试剂的配制 | 第44-45页 |
| ·主要仪器 | 第45页 |
| 2. 实验方法 | 第45-51页 |
| ·引物设计与合成 | 第45-46页 |
| ·目的片段的PCR扩增 | 第46页 |
| ·目的基因的TA克隆 | 第46-47页 |
| ·IL-2的TA克隆 | 第46页 |
| ·IL-6的TA克隆 | 第46页 |
| ·IL-6/2融合基因的TA克隆 | 第46-47页 |
| ·重组质粒的初步鉴定 | 第47-48页 |
| ·原核表达载体的构建 | 第48页 |
| ·重组表达菌株的培养及表达 | 第48页 |
| ·原核表达条件的优化 | 第48-49页 |
| ·重组表达蛋白的可溶性检测 | 第49页 |
| ·白介素2和6多克隆抗体的制备及其效价测定 | 第49-50页 |
| ·多克隆抗体的制备 | 第49页 |
| ·饱和硫酸铵法粗提IgG | 第49页 |
| ·琼脂扩散实验测定抗体效价 | 第49-50页 |
| ·融合表达产物的免疫印迹(Western-Blot) | 第50页 |
| ·表达产物的纯化与复性 | 第50-51页 |
| ·可溶性蛋白的纯化 | 第50页 |
| ·包涵体蛋白的纯化 | 第50-51页 |
| ·纯化蛋白的复性 | 第51页 |
| ·MTT法检测表达产物活性 | 第51页 |
| 3. 结果与分析 | 第51-55页 |
| ·目的片段TA克隆质粒双酶切鉴定 | 第51-52页 |
| ·目的片段原核表达载体的双酶切鉴定 | 第52页 |
| ·目的基因的诱导表达、可溶性检测与条件的优化 | 第52-53页 |
| ·多克隆抗体效价的测定 | 第53-54页 |
| ·目的蛋白的纯化与免疫印迹分析 | 第54页 |
| ·表达产物生物活性的检测 | 第54-55页 |
| 4. 讨论 | 第55-58页 |
| 第四章 重组大熊猫白细胞介素2、6及其融合蛋白在小鼠模型中对犬瘟热病毒基因工程苗的佐剂效应研究 | 第58-65页 |
| 1. 实验材料 | 第58-59页 |
| ·疫苗、细胞因子佐剂 | 第58页 |
| ·实验动物 | 第58页 |
| ·主要试剂 | 第58页 |
| ·主要仪器 | 第58-59页 |
| 2. 实验方法 | 第59-60页 |
| ·细胞因子佐剂的免前制备 | 第59页 |
| ·实验小鼠的分组与免疫 | 第59页 |
| ·动物分组 | 第59页 |
| ·免疫方法 | 第59页 |
| ·血清处理 | 第59页 |
| ·CDV抗体检测 | 第59-60页 |
| ·血清中IFN-γ、IL-4含量测定 | 第60页 |
| ·统计学分析 | 第60页 |
| 3. 结果与分析 | 第60-63页 |
| ·血清中CDV抗体监测 | 第60-61页 |
| ·血清中IL-4检测结果 | 第61-62页 |
| ·血清中IFN-γ检测结果 | 第62-63页 |
| 4. 讨论 | 第63-65页 |
| 全文总结 | 第65-66页 |
| 参考文献 | 第66-72页 |
| 致谢 | 第72-73页 |
| 附录 | 第73-74页 |
| 作者简介以及攻读硕士学位期间发表的学术论文 | 第74页 |
