| 符号说明 | 第1-10页 |
| 中文摘要 | 第10-12页 |
| Abstract | 第12-14页 |
| 1 引言 | 第14-33页 |
| ·辣椒疫霉病发生与防治研究进展 | 第14-19页 |
| ·辣椒疫霉病的发生、危害及症状 | 第14-15页 |
| ·辣椒疫霉及其生物学性状 | 第15页 |
| ·辣椒疫霉的生理分化 | 第15-16页 |
| ·辣椒疫霉病的发病条件和流行规律 | 第16页 |
| ·辣椒疫霉病的防治 | 第16-18页 |
| ·辣椒疫霉菌的基因组学研究 | 第18-19页 |
| ·植物病原真菌致病基因的研究现状 | 第19-23页 |
| ·角质酶、细胞壁降解酶类基因 | 第19-20页 |
| ·与侵染结构相关的基因 | 第20页 |
| ·与信号传导相关的基因 | 第20-21页 |
| ·与寄主代谢相关的基因 | 第21页 |
| ·真菌毒素类基因 | 第21-22页 |
| ·其他致病基因 | 第22-23页 |
| ·肉碱酰基转移酶(CAT)基因的研究进展 | 第23-25页 |
| ·CAT类基因的发现 | 第23-24页 |
| ·CAT类基因的研究进展 | 第24-25页 |
| ·农杆菌介导的基因瞬时表达体系 | 第25-26页 |
| ·瞬时表达体系 | 第25页 |
| ·瞬时表达体系的原理 | 第25页 |
| ·瞬时表达载体 | 第25-26页 |
| ·丛因沉默技术 | 第26-29页 |
| ·基因沉默 | 第26-27页 |
| ·基因沉默的机制 | 第27-28页 |
| ·卵菌基因沉默及其转化方法 | 第28-29页 |
| ·荧光定量PCR | 第29-30页 |
| ·免疫荧光染色技术 | 第30-32页 |
| ·实验目的及意义 | 第32-33页 |
| 2 材料与方法 | 第33-51页 |
| ·实验材料 | 第33-37页 |
| ·常用的菌株、载体与质粒 | 第33页 |
| ·常用试剂 | 第33-34页 |
| ·相关耗材和仪器 | 第34页 |
| ·常用培养基及有关溶液的配制 | 第34-37页 |
| ·实验方法 | 第37-51页 |
| ·生物信息学分析 | 第37-38页 |
| ·CAT基因筛选与序列比对 | 第37页 |
| ·基本理化性质分析 | 第37页 |
| ·信号肽预测 | 第37-38页 |
| ·跨膜区预测 | 第38页 |
| ·引物设计 | 第38-39页 |
| ·基因克隆与分离 | 第39-41页 |
| ·辣椒疫霉SD33总DNA提取 | 第39-40页 |
| ·辣椒疫霉菌株SD33总RNA的提取和cDNA的合成 | 第40-41页 |
| ·RT-PCR验证PcCAT基因是否为真基因 | 第41页 |
| ·PcCAT基因全长扩增引物设计与克隆 | 第41页 |
| ·辣椒疫霉PcCAT基因在菌丝体内表达模式构建 | 第41-42页 |
| ·诱导游动孢子 | 第41-42页 |
| ·荧光定量PCR分析侵染初期表达趋势 | 第42页 |
| ·表达载体的构建 | 第42-45页 |
| ·农杆菌瞬时表达载体构建 | 第42-43页 |
| ·基因沉默pHAM34载体的构建 | 第43-44页 |
| ·原核表达载体的构建 | 第44-45页 |
| ·农杆菌介导的瞬时表达 | 第45页 |
| ·农杆菌感受态细胞制备 | 第45页 |
| ·冻融法转化农杆菌 | 第45页 |
| ·农杆菌接种 | 第45页 |
| ·PEG介导的原生质体转化 | 第45-47页 |
| ·辣椒疫霉的活化培养 | 第45-46页 |
| ·原生质体转化步骤 | 第46页 |
| ·RT-PCR检测 | 第46页 |
| ·荧光定量PCR检测 | 第46页 |
| ·生物学性状观察 | 第46页 |
| ·致病性检测 | 第46-47页 |
| ·互作早期附着胞形态的观察 | 第47页 |
| ·PcCAT基因原核表达 | 第47-49页 |
| ·目的蛋白表达 | 第47-48页 |
| ·目的蛋白纯化 | 第48-49页 |
| ·免疫荧光染色技术 | 第49-51页 |
| ·一抗的制备 | 第49页 |
| ·荧光素标记的二抗的选择 | 第49页 |
| ·免疫荧光染色实验 | 第49-51页 |
| 3 结果与分析 | 第51-75页 |
| ·辣椒疫霉PcCAT基因克隆及序列分析 | 第51-58页 |
| ·RT-PCR检测 | 第51页 |
| ·基因克隆 | 第51-57页 |
| ·同源性分析 | 第57-58页 |
| ·辣椒疫霉CAT基因系统进化分析 | 第58页 |
| ·辣椒疫霉PcCAT基因在互作过程中表达趋势分析 | 第58-59页 |
| ·PcCAT基因农杆菌瞬时表达 | 第59-62页 |
| ·PVX重组载体的构建及农杆菌转化 | 第59-60页 |
| ·PcCAT基因农杆菌转化子在辣椒体内瞬时表达 | 第60-61页 |
| ·PcCAT基因农杆菌转化子在烟草体内瞬时表达 | 第61-62页 |
| ·一抗的获得 | 第62-67页 |
| ·原核表达载体的构建 | 第62-63页 |
| ·目的蛋白的表达 | 第63-65页 |
| ·PcCAT1基因的表达 | 第63-64页 |
| ·PcCAT2基因的表达 | 第64-65页 |
| ·目的蛋白的纯化 | 第65-66页 |
| ·PcCAT1蛋白的纯化 | 第65页 |
| ·PcCAT2蛋白的纯化 | 第65-66页 |
| ·免疫大白兔 | 第66-67页 |
| ·PcCAT基因稳定沉默 | 第67-75页 |
| ·稳定沉默突变体的获得 | 第67-68页 |
| ·沉默转化子的表型分析 | 第68-70页 |
| ·沉默转化子的致病性测定 | 第70-71页 |
| ·互作过程中侵染结构的形态学观察 | 第71-75页 |
| 4 结论与讨论 | 第75-78页 |
| ·PcCAT1和PcCAT2基因序列信息分析 | 第75页 |
| ·PcCAT1和PcCAT2基因在病原与寄主互作过程中表达模式分析 | 第75页 |
| ·PcCAT1和PcCAT2基因瞬时表达后农杆菌接种症状分析 | 第75-76页 |
| ·PcCAT1和PcCAT2基因沉默 | 第76-78页 |
| 参考文献 | 第78-86页 |
| 致谢 | 第86-87页 |
| 附录 | 第87-89页 |
