| 摘要 | 第1-5页 |
| ABSTRACT | 第5-10页 |
| 引言 | 第10-19页 |
| 1 三聚体自转运粘附素研究进展 | 第10-18页 |
| ·TAA 的多样性 | 第11-12页 |
| ·TAA 的生物学功能 | 第12-14页 |
| ·TAA 的分泌机制 | 第14-15页 |
| ·TAA 的区域结构和功能 | 第15-17页 |
| ·小结 | 第17-18页 |
| 2 本研究的目的和意义 | 第18-19页 |
| 第一章 哈维弧菌 TAA 的基因克隆和序列分析 | 第19-35页 |
| 1 材料与方法 | 第19-26页 |
| ·试验用仪器 | 第19页 |
| ·质粒和菌株 | 第19-20页 |
| ·试剂 | 第20页 |
| ·主要试剂配制方法 | 第20-21页 |
| ·哈维弧菌 DNA 提取 | 第21页 |
| ·引物设计 | 第21-22页 |
| ·哈维弧菌 TAA 序列的扩增和拼接 | 第22-25页 |
| ·哈维弧菌 TAA 序列的分析 | 第25-26页 |
| 2 结果 | 第26-33页 |
| ·哈维弧菌 DNA 电泳结果 | 第26页 |
| ·同源区域的扩增结果 | 第26-27页 |
| ·酶切哈维弧菌 DNA 结果 | 第27页 |
| ·基因步移结果 | 第27-28页 |
| ·序列测序结果 | 第28页 |
| ·序列生物信息学分析结果 | 第28-33页 |
| 3 讨论 | 第33-34页 |
| 4 小结 | 第34-35页 |
| 第二章 哈维弧菌 TAA 基因的原核表达和粘附活性研究 | 第35-52页 |
| 1 材料与方法 | 第35-44页 |
| ·试验用仪器 | 第35页 |
| ·材料 | 第35页 |
| ·主要试剂 | 第35-36页 |
| ·试剂配制方法 | 第36-37页 |
| ·vhp 片段的扩增 | 第37-38页 |
| ·重组表达载体 pRSET A-vhp 的构建 | 第38-39页 |
| ·表达菌株 BL21(DE3)plysS-pRSET A- vhp 的制备 | 第39页 |
| ·IPTG 诱导融合蛋白的表达 | 第39页 |
| ·SDS-PAGE 电泳 | 第39-41页 |
| ·融合蛋白的可溶性检测 | 第41页 |
| ·Western blot 检测 | 第41页 |
| ·融合蛋白的纯化 | 第41-42页 |
| ·多克隆抗体的制备及抗体效价检测 | 第42页 |
| ·重组蛋白的粘附活性研究 | 第42-44页 |
| 2 结果 | 第44-49页 |
| ·抗原性分析 | 第44页 |
| ·PCR 结果 | 第44-45页 |
| ·质粒的双酶切 | 第45页 |
| ·重组蛋白的诱导表达 | 第45-46页 |
| ·重组蛋白的可溶性检测 | 第46页 |
| ·western blot 验证分析 | 第46页 |
| ·重组蛋白的纯化 | 第46-47页 |
| ·抗体效价的检测 | 第47页 |
| ·细胞粘附实验 | 第47-48页 |
| ·细胞粘附抑制试验 | 第48-49页 |
| 3 讨论 | 第49-50页 |
| 4 小结 | 第50-52页 |
| 第三章 环境因子对 vh-taa 基因表达的影响 | 第52-62页 |
| 1 材料与方法 | 第52-56页 |
| ·试验用仪器 | 第52页 |
| ·试验用菌株 | 第52页 |
| ·主要试剂 | 第52-53页 |
| ·主要试剂配制方法 | 第53页 |
| ·培养基的选取 | 第53页 |
| ·培养条件的选取 | 第53页 |
| ·RNA 提取 | 第53-54页 |
| ·cDNA 的合成 | 第54页 |
| ·Q-PCR 检测 | 第54-56页 |
| 2 结果 | 第56-60页 |
| ·哈维弧菌在不同培养基中 OD600值变化曲线 | 第56页 |
| ·RNA 提取 | 第56-57页 |
| ·PCR 条件优化 | 第57-58页 |
| ·标准曲线 | 第58页 |
| ·环境因子变化对 vh-taa 表达的影响 | 第58-60页 |
| 3 讨论 | 第60-61页 |
| 4 小结 | 第61-62页 |
| 第四章 哈维弧菌 LAMP 检测方法的建立 | 第62-69页 |
| 1 材料与方法 | 第62-64页 |
| ·试验材料 | 第62页 |
| ·菌体培养及 DNA 模板的制备 | 第62页 |
| ·LAMP 引物设计 | 第62-63页 |
| ·LAMP 反应的建立 | 第63页 |
| ·特异性试验 | 第63页 |
| ·反应条件优化 | 第63页 |
| ·灵敏度试验 | 第63-64页 |
| 2 结果 | 第64-67页 |
| ·LAMP 检测方法的建立 | 第64页 |
| ·特异性检测 | 第64-65页 |
| ·反应条件的优化 | 第65-66页 |
| ·灵敏度检测 | 第66-67页 |
| 3 讨论 | 第67-68页 |
| 4 小结 | 第68-69页 |
| 结论 | 第69-70页 |
| 参考文献 | 第70-78页 |
| 附录 | 第78-79页 |
| 攻读硕士期间发表的文章 | 第79-80页 |
| 致谢 | 第80页 |