| 摘要 | 第1-4页 |
| Abstract | 第4-7页 |
| 第一章 绪论 | 第7-17页 |
| ·COD 概述 | 第7-13页 |
| ·COD 的来源及性质 | 第7-9页 |
| ·COD 的催化机制 | 第9-10页 |
| ·COD 的结构 | 第10-11页 |
| ·COD 及其产物的应用前景 | 第11-13页 |
| ·COD 基因的研究进展 | 第13-14页 |
| ·COD 的分离纯化研究 | 第14-16页 |
| ·COD 的提取 | 第14页 |
| ·COD 的纯化 | 第14-15页 |
| ·分离纯化中存在的问题 | 第15-16页 |
| ·立题背景和研究内容 | 第16-17页 |
| 第二章 材料与方法 | 第17-25页 |
| ·材料与设备 | 第17-18页 |
| ·菌株和质粒 | 第17页 |
| ·工具酶及分子量参照物 | 第17页 |
| ·主要试剂盒及化学试剂 | 第17页 |
| ·引物设计 | 第17页 |
| ·实验仪器 | 第17-18页 |
| ·重组质粒 pETChoB、pETChoBc 的构建及鉴定 | 第18-20页 |
| ·PCR 扩增 ChoB、ChoBc 基因 | 第18-19页 |
| ·重组质粒的构建 | 第19-20页 |
| ·E.coli 的转化 | 第20页 |
| ·阳性菌落的筛选及重组质粒的酶切鉴定 | 第20页 |
| ·重组酶 BCO 和 BCOc 在 E.coli 中的诱导表达 | 第20-22页 |
| ·重组菌诱导后生长特性测定 | 第20-21页 |
| ·菌体浓度的计算 | 第21页 |
| ·最适乳糖诱导时间的确定 | 第21页 |
| ·重组酶的活性测定 | 第21页 |
| ·重组酶含量测定 | 第21页 |
| ·重组酶 SDS-PAGE 分析 | 第21-22页 |
| ·重组 COD 的分离纯化 | 第22-24页 |
| ·IMAC(Ni~(2+))分离纯化 BCOc 和 BCOn | 第22页 |
| ·制备类辅酶配体亲和介质分离纯化 BCO、BCOc 和 BCOn | 第22-23页 |
| ·高压液相色谱（HPLC）检测重组酶纯度 | 第23-24页 |
| ·BCO，BCOc 和 BCOn 酶学性质的测定 | 第24-25页 |
| ·最适 pH 和 pH 稳定性的考察 | 第24页 |
| ·最适温度和温度稳定性的考察 | 第24页 |
| ·金属离子对酶活力的影响 | 第24页 |
| ·酶的动力学参数测定 | 第24-25页 |
| 第三章 结果与讨论 | 第25-45页 |
| ·重组 COD 在 E.coli 中的表达 | 第25-29页 |
| ·构建重组质粒 pETChoB、pETChoBc | 第25-26页 |
| ·重组 COD 的诱导表达 | 第26-29页 |
| ·重组 COD 的分离纯化 | 第29-40页 |
| ·IMAC（Ni~(2+)）分离纯化 BCOc 和 BCOn | 第30-32页 |
| ·类辅酶配体亲和介质的合成 | 第32-35页 |
| ·类辅酶 R-2 介质分离纯化 BCO， BCOc 和 BCOn | 第35-40页 |
| ·BCO，BCOc 和 BCOn 酶学性质的研究 | 第40-45页 |
| ·最适 pH 及 pH 稳定性的变化 | 第40-41页 |
| ·最适温度和温度稳定性的考察 | 第41-43页 |
| ·金属离子对重组酶活力的影响 | 第43页 |
| ·酶促反应动力学性质 | 第43-45页 |
| 主要结论 | 第45-46页 |
| 展望 | 第46-47页 |
| 致谢 | 第47-49页 |
| 参考文献 | 第49-55页 |
| 附录一 试剂的配制 | 第55-56页 |
| 附录二 SDS-PAGE 凝胶电泳样品制备 | 第56-57页 |
| 附录三 BSA 标准曲线 | 第57页 |
| 附录四 作者在攻读硕士学位期间发表的论文 | 第57页 |
