| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-9页 |
| 第1章 前言 | 第9-22页 |
| ·BVDV简介 | 第9页 |
| ·BVDV生物学特性 | 第9-12页 |
| ·BVDV的理化性质 | 第10页 |
| ·BVDV的分型 | 第10-11页 |
| ·BVDV的结构蛋白研究进展 | 第11-12页 |
| ·BVDV流行病学研究进展及持续性感染 | 第12-15页 |
| ·国外BVD流行现况 | 第13-14页 |
| ·国内BVD流行现况 | 第14-15页 |
| ·持续性感染 | 第15页 |
| ·BVDV检测方法研究进展 | 第15-19页 |
| ·病毒分离 | 第16页 |
| ·电镜技术 | 第16-17页 |
| ·琼脂扩散试验 | 第17页 |
| ·病毒中和试验 | 第17页 |
| ·酶联免疫吸附试验 | 第17-18页 |
| ·免疫荧光技术 | 第18页 |
| ·反转录-多聚链式反应(RT-PCR)技术 | 第18-19页 |
| ·BVD的防治 | 第19-20页 |
| ·研究目的和意义 | 第20-22页 |
| 第2章 BVDV-E0基因原核表达载体的构建及表达 | 第22-40页 |
| ·实验材料 | 第22-24页 |
| ·细胞、病毒株、质粒及菌种 | 第22页 |
| ·血清及抗体 | 第22页 |
| ·主要试剂 | 第22-23页 |
| ·主要仪器 | 第23页 |
| ·引物 | 第23-24页 |
| ·实验方法 | 第24-33页 |
| ·牛肾细胞的制备及BVDV-C_(24)V的增殖 | 第24页 |
| ·BVDV-E0基因的克隆及序列分析 | 第24-29页 |
| ·BVDV-E0基因原核表达载体的构建 | 第29-30页 |
| ·阳性重组质粒pET-28a-E0的表达与纯化 | 第30-33页 |
| ·实验结果 | 第33-38页 |
| ·细胞培养及C_(24)V毒株增殖结果 | 第33-34页 |
| ·BVDV-E0基因RT-PCR的结果 | 第34页 |
| ·重组质粒pMD18-T-E0的鉴定与测序结果分析 | 第34-35页 |
| ·pET-28a-E0原核表达载体的鉴定 | 第35页 |
| ·重组质粒pET-28a-E0表达产物的SDS-PAGE | 第35-36页 |
| ·目的蛋白的纯化 | 第36-38页 |
| ·目的蛋白的Western blot | 第38页 |
| ·讨论 | 第38-40页 |
| ·细胞培养与病毒增殖 | 第38-39页 |
| ·RNA的提取 | 第39-40页 |
| 第3章 间接ELISA方法的建立 | 第40-51页 |
| ·间接ELISA反应条件的优化 | 第40-41页 |
| ·抗原包被最佳浓度与血清最佳稀释度的选择 | 第40页 |
| ·最佳封闭液及封闭时间的确定 | 第40-41页 |
| ·血清最适作用时间的测定 | 第41页 |
| ·酶标二抗最佳工作浓度及工作时间的测定 | 第41页 |
| ·底物工作时间的测定 | 第41页 |
| ·阴阳性临界值的确定 | 第41-42页 |
| ·敏感性试验 | 第42页 |
| ·特异性试验 | 第42页 |
| ·重复性试验 | 第42-43页 |
| ·批内重复 | 第42页 |
| ·批间重复 | 第42-43页 |
| ·与商品化试剂盒的比较试验 | 第43页 |
| ·实验结果 | 第43-49页 |
| ·抗原包被最佳浓度与血清最佳稀释度的确定 | 第43-44页 |
| ·最佳封闭液及封闭时间的确定 | 第44-45页 |
| ·血清最适作用时间的确定 | 第45页 |
| ·酶标二抗最佳工作浓度及工作时间的测定 | 第45页 |
| ·底物工作时间的测定 | 第45-46页 |
| ·阴阳性临界值的确定 | 第46页 |
| ·特异性试验 | 第46-47页 |
| ·敏感性试验 | 第47页 |
| ·重复性试验 | 第47-49页 |
| ·与商品化试剂盒的比较试验 | 第49页 |
| ·讨论 | 第49-51页 |
| 第4章 结论 | 第51-52页 |
| 参考文献 | 第52-58页 |
| 致谢 | 第58-59页 |
| 作者简介 | 第59页 |
