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副猪嗜血杆菌外膜蛋白OmpP5单克隆抗体的制备及其生物学特性研究

摘要第1-3页
ABSTRACT第3-9页
第1章 副猪嗜血杆菌病的研究进展第9-21页
   ·病原学特性第9-14页
     ·形态与染色特性第9页
     ·培养特性第9-10页
     ·生化特性第10页
     ·抵抗力第10页
     ·血清分型第10-11页
     ·主要毒力因子第11-14页
   ·流行病学第14-15页
   ·临床症状和病理变化第15-16页
     ·临床症状第15-16页
     ·病理变化第16页
     ·病理组织学变化第16页
   ·实验室诊断第16-19页
     ·微生物学诊断第16-17页
     ·分子生物学诊断第17页
     ·血清学诊断第17-19页
   ·防治第19-21页
第2章 HPS Omp P5 单克隆抗体的制备第21-37页
   ·材料第21-23页
     ·试验动物和细胞第21页
     ·实验仪器第21-22页
     ·菌种第22页
     ·主要试剂第22页
     ·主要试剂配制第22-23页
   ·抗原的准备第23-26页
     ·免疫抗原的准备第23页
     ·筛选抗原(Omp P5 蛋白)的制备第23-26页
   ·动物免疫第26页
     ·动物准备第26页
     ·免疫程序第26页
   ·骨髓瘤细胞的准备第26-27页
   ·饲养细胞的准备第27页
   ·脾细胞的准备第27页
   ·细胞融合第27-28页
   ·观察细胞的生长情况第28页
   ·杂交瘤细胞的筛选第28-29页
     ·细胞培养上清的收集第28页
     ·ELISA 检测细胞培养上清第28-29页
   ·阳性杂交瘤细胞的克隆化第29-30页
     ·阳性杂交瘤细胞准备第29页
     ·阳性杂交瘤克隆化第29-30页
   ·杂交瘤细胞的冻存与复苏第30-31页
     ·杂交瘤细胞的冻存第30页
     ·杂交瘤细胞的复苏第30-31页
   ·腹水的制备第31页
   ·单抗腹水的纯化第31-32页
     ·饱和硫酸铵的配制第31页
     ·腹水单抗的提纯第31-32页
   ·结果第32页
   ·Omp P5 蛋白的纯化及 Western-blotting 检测第32-33页
     ·表达蛋白达的 SDS-PAGE 分析第32-33页
     ·表达蛋白的免疫印迹(Western-blotting)检测第33页
   ·小鼠血清抗体效价的间接 ELISA 法检测第33页
   ·分泌抗 OMP P5 单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立第33-34页
   ·小结与讨论第34页
   ·小结第34-35页
   ·讨论第35-37页
第3章 生物学特性研究第37-47页
   ·材料第37页
     ·主要仪器第37页
     ·主要试剂第37页
   ·方法第37-40页
     ·杂交瘤细胞上清与腹水单抗效价的测定第37页
     ·单克隆抗体IgG亚类鉴定第37-38页
     ·单克隆抗体特异性检测第38-39页
     ·杂交瘤细胞分泌抗体的稳定性研究第39页
     ·单克隆抗体与天然抗原的激光共聚焦免疫荧光检测第39-40页
   ·结果第40-42页
     ·杂交瘤细胞上清与腹水单抗效价的测定第40页
     ·单克隆抗体IgG亚类鉴定第40-41页
     ·单克隆抗体特异性检测第41页
     ·杂交瘤细胞稳定性检测结果第41-42页
     ·单克隆抗体与天然抗原的激光共聚焦免疫荧光检测第42页
   ·小结与讨论第42-44页
     ·小结第42-44页
   ·讨论第44-47页
第4章 结论第47-48页
参考文献第48-53页
缩略语词汇表第53-54页
附录第54-57页
 一、ELISA检测相关试剂配制第54-55页
 二、SDS-PAGE相关试剂配制第55-56页
 三、免疫转印试剂配制第56-57页
致谢第57-58页
攻读硕士学位期间的研究成果第58页

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