一种抗蛋白酶的植酸酶转基因猪成纤维细胞系的建立
| 摘要 | 第1-6页 |
| ABSTRACT | 第6-12页 |
| 第一章 文献综述 | 第12-23页 |
| ·植酸酶研究现状 | 第12-17页 |
| ·植酸 | 第12页 |
| ·植酸酶 | 第12-17页 |
| ·巴斯德毕赤酵母表达系统 | 第17-18页 |
| ·慢病毒研究进展 | 第18-19页 |
| ·慢病毒表达系统 | 第18-19页 |
| ·慢病毒载体的安全性 | 第19页 |
| ·转基因动物研究进展 | 第19-21页 |
| ·转基因动物的一般制备方法 | 第19-20页 |
| ·转基因动物的应用 | 第20-21页 |
| ·转基因技术存在的问题 | 第21页 |
| ·本研究选题的研究意义与目的 | 第21-23页 |
| 第二章 嵌合体植酸酶在毕赤酵母的表达 | 第23-36页 |
| ·实验材料 | 第23-25页 |
| ·菌株及质粒 | 第23页 |
| ·药品及试剂盒 | 第23页 |
| ·试剂的配置 | 第23-25页 |
| ·实验主要仪器 | 第25页 |
| ·实验方法 | 第25-33页 |
| ·植酸酶基因序列Cafp的人工合成 | 第25-27页 |
| ·毕赤酵母表达载体的构建 | 第27-28页 |
| ·大肠杆菌的转化 | 第28-29页 |
| ·大肠杆菌质粒小量提取 | 第29页 |
| ·毕赤酵母的转化 | 第29-31页 |
| ·毕赤酵母阳性细胞的鉴定 | 第31-32页 |
| ·植酸酶活性的测定 | 第32-33页 |
| ·结果 | 第33-35页 |
| ·毕赤酵母表达载体的鉴定 | 第33-34页 |
| ·毕赤酵母表达阳性细胞的鉴定 | 第34页 |
| ·植酸酶对蛋白酶耐受性的测定 | 第34-35页 |
| ·讨论 | 第35-36页 |
| 第三章 植酸酶转基因猪成纤维细胞系的构建 | 第36-52页 |
| ·实验材料 | 第36-37页 |
| ·菌株及质粒 | 第36页 |
| ·药品及试剂盒 | 第36页 |
| ·试剂的配置 | 第36-37页 |
| ·实验方法 | 第37-47页 |
| ·猪基因组DNA的提取 | 第37页 |
| ·大肠杆菌质粒小量提取 | 第37页 |
| ·植酸酶特异性表达载体的构建 | 第37-41页 |
| ·转染DNA的制备 | 第41页 |
| ·猪原代成纤维细胞的分离纯化 | 第41-42页 |
| ·细胞传代培养 | 第42页 |
| ·细胞冻存 | 第42页 |
| ·细胞复苏 | 第42-43页 |
| ·细胞转染 | 第43页 |
| ·慢病毒载体构建 | 第43-44页 |
| ·慢病毒生产 | 第44-45页 |
| ·慢病毒滴度定测 | 第45页 |
| ·慢病毒感染 | 第45页 |
| ·阳性细胞系的鉴定 | 第45-47页 |
| ·结果 | 第47-50页 |
| ·长白猪成纤维细胞的分离及纯化 | 第47页 |
| ·慢病毒包装及滴度测定 | 第47-48页 |
| ·植酸酶转基因猪成纤维细胞系的建立 | 第48-49页 |
| ·转基因植酸酶猪成纤维细胞系的鉴定 | 第49-50页 |
| ·讨论 | 第50-52页 |
| 第四章 结论 | 第52-53页 |
| 参考文献 | 第53-61页 |
| 致谢 | 第61-62页 |
| 攻读硕士学位期间发表的学术论文目录 | 第62页 |
