| 摘要 | 第1-7页 |
| 目录 | 第7-12页 |
| 第一部分 文献综述 | 第12-31页 |
| 第一章 水稻白叶枯病无毒因子研究进展 | 第13-24页 |
| 1 PPR与PAMP | 第13-14页 |
| 2 Xa2 1的发现与调控 | 第14-17页 |
| ·白叶枯病抗性基因Xa21的发现 | 第15页 |
| ·XA21的活性调控 | 第15-17页 |
| 3 水稻白叶枯病无毒基因Ax21研究进展 | 第17-24页 |
| ·Ax21的发现与结构 | 第17-19页 |
| ·Ax21的表达与活性调控 | 第19-20页 |
| ·Ax21的生物学功能 | 第20-24页 |
| 第二章 硫酸盐活化酶复合体(SAC)基因研究进展 | 第24-28页 |
| 1 植物和微生物对硫的吸收 | 第24-25页 |
| 2 硫活化酶复合体 | 第25-26页 |
| 3 硫吸收对水稻的意义 | 第26-28页 |
| 第三章 本课题的研究目的及意义 | 第28-30页 |
| 技术路线 | 第30-31页 |
| 第二部分 研究内容 | 第31-67页 |
| 第一章 Ax21硫酸化部位及酶切部位定位 | 第31-45页 |
| 1 前言 | 第31-32页 |
| 2 材料与方法 | 第32-38页 |
| ·酶与生化试剂 | 第32页 |
| ·菌株与载体 | 第32页 |
| ·pSKB4-raxST-CFP,pSKB4-ax21-GFP载体的构建 | 第32-37页 |
| ·引物设计 | 第32-33页 |
| ·PCR扩增条件及电泳检测 | 第33页 |
| ·PCR产物的纯化与连接 | 第33-34页 |
| ·E.coli DH5α感受态细胞的制备 | 第34页 |
| ·连接产物的转化 | 第34-35页 |
| ·测序 | 第35页 |
| ·质粒提取 | 第35页 |
| ·质粒酶切 | 第35-36页 |
| ·酶切产物割胶回收 | 第36页 |
| ·载体连接、转化 | 第36-37页 |
| ·白叶枯病菌的电转化 | 第37-38页 |
| ·白叶枯病菌感受态制备 | 第37-38页 |
| ·白叶枯病菌电转化 | 第38页 |
| ·突变菌株鉴定 | 第38页 |
| ·荧光检测 | 第38页 |
| 3 实验结果 | 第38-43页 |
| ·载体酶切验证 | 第38-40页 |
| ·pSKB4-raxST-CFP酶切验证 | 第38-39页 |
| ·pSKB4-ax21-GFP酶切验证 | 第39-40页 |
| ·菌株鉴定 | 第40-42页 |
| ·PXO99~(raxST-CFP)突变菌株的鉴定 | 第40-41页 |
| ·PXO99~(ax21-GFP)突变菌株的鉴定 | 第41-42页 |
| ·荧光检测 | 第42-43页 |
| ·Ax21的硫酸化定位 | 第42页 |
| ·Ax21的酶切定位 | 第42-43页 |
| 4 讨论 | 第43-45页 |
| 第二章 Ax21与RaxST的纯化 | 第45-55页 |
| 1 前言 | 第45页 |
| 2 材料与方法 | 第45-50页 |
| ·酶与生化试剂 | 第45页 |
| ·菌株与载体 | 第45页 |
| ·pSKB4-raxST与pET30a-ax21表达载体的构建 | 第45-46页 |
| ·引物设计 | 第45页 |
| ·PCR扩增及电泳检测 | 第45-46页 |
| ·PCR产物的纯化与测序 | 第46页 |
| ·质粒提取 | 第46页 |
| ·质粒酶切及片段回收 | 第46页 |
| ·载体连接、转化 | 第46页 |
| ·RaxST、Ax21蛋白的表达与纯化 | 第46-48页 |
| ·蛋白的诱导表达 | 第46页 |
| ·透析袋预处理 | 第46页 |
| ·菌体的裂解 | 第46-47页 |
| ·包含体蛋白的溶解及复性 | 第47页 |
| ·复性蛋白的纯化 | 第47-48页 |
| ·SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳检测 | 第48-49页 |
| ·制胶 | 第48-49页 |
| ·上样 | 第49页 |
| ·电泳 | 第49页 |
| ·染色 | 第49页 |
| ·脱色 | 第49页 |
| ·蛋白浓度测定 | 第49-50页 |
| ·试剂配制 | 第49页 |
| ·标准曲线的制作 | 第49页 |
| ·蛋白浓度测定 | 第49-50页 |
| 3 实验结果 | 第50-54页 |
| ·酶切验证结果 | 第50-51页 |
| ·pSKB4-raxST酶切验证 | 第50-51页 |
| ·pET30a-ax21酶切验证 | 第51页 |
| ·SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳检测目的蛋白的诱导表达及纯化 | 第51-53页 |
| ·RaxST蛋白的表达纯化 | 第51-52页 |
| ·Ax21蛋白的表达纯化 | 第52-53页 |
| ·蛋白定量 | 第53-54页 |
| 4 讨论 | 第54-55页 |
| 第三章 农杆菌介导球形红细菌硫酸盐活化酶复合体(SAC)基因转化水稻 | 第55-67页 |
| 1 前言 | 第55页 |
| 2 材料与方法 | 第55-61页 |
| ·酶与生化试剂 | 第55页 |
| ·菌株与载体 | 第55页 |
| ·培养基 | 第55-56页 |
| ·pCAMBIA-1301-SAC载体的构建 | 第56-58页 |
| ·引物设计 | 第56页 |
| ·PCR扩增及电泳检测 | 第56页 |
| ·PCR产物的转化与测序 | 第56页 |
| ·质粒提取与转化 | 第56页 |
| ·质粒酶切及酶切产物回收 | 第56页 |
| ·质粒连接转化 | 第56-57页 |
| ·pCAMBIA-1301-SAC载体酶切验证 | 第57-58页 |
| ·pCAMBIA-1301-SAC载体转化农杆菌 | 第58页 |
| ·农杆菌感受态制备 | 第58页 |
| ·转化农杆菌 | 第58页 |
| ·农杆菌介导的水稻遗传转化 | 第58-60页 |
| ·愈伤组织诱导及继代 | 第59页 |
| ·愈伤组织与农杆菌共培养 | 第59-60页 |
| ·抗性愈伤组织的筛选和幼苗分化 | 第60页 |
| ·生根、炼苗、移栽 | 第60页 |
| ·转基因苗检测 | 第60-61页 |
| ·GUS染色验证 | 第61页 |
| ·PCR检测 | 第61页 |
| 3 实验结果 | 第61-66页 |
| ·pCAMBIA-1301-SAC质粒酶切验证 | 第61-62页 |
| ·农杆菌介导SAC基因转化水稻 | 第62-63页 |
| ·转基因苗验证 | 第63-66页 |
| ·PCR验证 | 第63-64页 |
| ·GUS验证 | 第64-66页 |
| 4 讨论 | 第66-67页 |
| 结论与展望 | 第67-68页 |
| 参考文献 | 第68-76页 |
| 攻读学位期间取得的研究成果 | 第76-77页 |
| 致谢 | 第77-79页 |
