| 摘要 | 第1-9页 |
| Abstract | 第9-10页 |
| 缩略词表 | 第10-11页 |
| 第1章 文献综述 | 第11-24页 |
| ·猪链球菌病概述 | 第11-13页 |
| ·病原及流行病学 | 第11-12页 |
| ·病原 | 第11页 |
| ·自然感染及传播途径 | 第11-12页 |
| ·易感动物 | 第12页 |
| ·临床症状和病理变化 | 第12-13页 |
| ·临床症状 | 第12页 |
| ·病理变化 | 第12-13页 |
| ·猪链球菌血清型2型毒力因子的研究进展 | 第13-19页 |
| ·已阐明的毒力因子 | 第13-15页 |
| ·荚膜多糖 | 第13页 |
| ·溶菌酶释放蛋白和胞外因子 | 第13-14页 |
| ·溶血素 | 第14页 |
| ·纤连蛋白结合蛋白 | 第14页 |
| ·谷氨酸脱氢酶 | 第14-15页 |
| ·新鉴定的毒力元件 | 第15-18页 |
| ·Sao蛋白 | 第15页 |
| ·存在于89K毒力岛的双信号转导系统 | 第15页 |
| ·dltA基因 | 第15-16页 |
| ·pgdA基因 | 第16页 |
| ·srtA基因 | 第16页 |
| ·Ⅳ型工肽基肽酶 | 第16-17页 |
| ·毒力调控子R | 第17页 |
| ·烯醇酶 | 第17页 |
| ·次黄嘌呤单磷酸脱氢酶 | 第17-18页 |
| ·谷氨酰胺合成酶 | 第18页 |
| ·毒力因子研究小结 | 第18-19页 |
| ·B细胞表位预测的原则和方法 | 第19-22页 |
| ·蛋白质抗原的表位 | 第19-20页 |
| ·表位的概念 | 第19页 |
| ·表位的分类 | 第19-20页 |
| ·细胞表位的预测与筛选 | 第20-22页 |
| ·线性B细胞抗原表位的预测 | 第20-21页 |
| ·B细胞表位的实验检验 | 第21-22页 |
| ·研究目的与意义 | 第22-24页 |
| 第2章 材料与方法 | 第24-39页 |
| ·实验材料 | 第24-28页 |
| ·菌株 | 第24页 |
| ·载体 | 第24-25页 |
| ·工具酶及主要试剂 | 第25页 |
| ·主要缓冲液与相关试剂的配制 | 第25-27页 |
| ·培养基及抗生素 | 第25-26页 |
| ·琼脂糖凝胶电泳试剂及缓冲液 | 第26页 |
| ·SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳缓冲液及试剂 | 第26-27页 |
| ·Western Blot缓冲液及试剂 | 第27页 |
| ·ELISA缓冲液及试剂 | 第27页 |
| ·其他试剂 | 第27页 |
| ·生物信息学软件 | 第27-28页 |
| ·试验方法 | 第28-39页 |
| ·SS2SDLVDU株的培养与PCR鉴定 | 第28-29页 |
| ·SS2SDLVDU株的培养 | 第28页 |
| ·基因组提取 | 第28页 |
| ·PCR鉴定 | 第28-29页 |
| ·菌种保存 | 第29页 |
| ·SS2SDLVDU株对CDl小鼠毒力测定 | 第29-31页 |
| ·毒力基因表型鉴定 | 第29-30页 |
| ·最小100%致死剂量与最大0%致死剂量测定 | 第30页 |
| ·LD50的测定 | 第30-31页 |
| ·MRP、sspA抗原肽段选取 | 第31页 |
| ·MRP抗原肽段选取 | 第31页 |
| ·sspA氨基酸序列分析 | 第31页 |
| ·优势表位簇抗原重组表达系统的构建 | 第31-34页 |
| ·SS2培养与基因组提取 | 第31页 |
| ·PCR引物设计及抗原肽基因扩增 | 第31-32页 |
| ·pET32a载体质粒的获取 | 第32页 |
| ·扩增产物和载体质粒的酶切与连接 | 第32-33页 |
| ·重组表达载体的转化与鉴定 | 第33-34页 |
| ·重组克隆与表达菌株的保存 | 第34页 |
| ·重组抗原的获取与鉴定 | 第34-35页 |
| ·重组抗原的诱导表达 | 第34页 |
| ·重组抗原的纯化 | 第34-35页 |
| ·Western Blot检测 | 第35页 |
| ·灭活SS2 CD1小鼠免疫血清制备 | 第35-36页 |
| ·重组抗原CD1小鼠免疫血清制备 | 第36页 |
| ·重组抗原CDl小鼠免疫血清抗体水平检测ELISA方法的建立 | 第36-37页 |
| ·包被原制备 | 第36页 |
| ·方阵滴定 | 第36-37页 |
| ·CD1小鼠免疫安全性试验与免疫效力试验及抗体水平监测 | 第37-39页 |
| ·免疫原制备 | 第37页 |
| ·免疫安全性试验 | 第37页 |
| ·免疫效力试验 | 第37-38页 |
| ·抗体水平监测 | 第38-39页 |
| 第3章 结果与分析 | 第39-51页 |
| ·SS2SDLVDU的培养与PCR鉴定 | 第39-40页 |
| ·SS2SDLVDU株毒力测定 | 第40-42页 |
| ·毒力表型鉴定 | 第40-41页 |
| ·Dm、Dn值测定 | 第41页 |
| ·LD50测定 | 第41-42页 |
| ·MRP、sspA抗原肽选取 | 第42-44页 |
| ·MRP抗原肽选取 | 第42-43页 |
| ·sspA抗原肽选取 | 第43-44页 |
| ·重组抗原表达系统构建 | 第44-46页 |
| ·重组抗原肽基因的PCR扩增 | 第44-45页 |
| ·重组表达载体pET32a-mrp-1与pET32a-prtS-1酶切鉴定 | 第45-46页 |
| ·重组抗原的诱导表达与纯化 | 第46-47页 |
| ·重组蛋白诱导表达与SDS-PAGE | 第46页 |
| ·重组蛋白的纯化 | 第46-47页 |
| ·重组抗原Western Blot鉴定 | 第47-48页 |
| ·抗原包被浓度和血清稀释度的确定 | 第48-49页 |
| ·小鼠免疫安全性试验与抗体水平监测及免疫效力试验 | 第49-51页 |
| ·小鼠免疫安全性试验 | 第49页 |
| ·抗体水平监测 | 第49页 |
| ·小鼠免疫效力试验 | 第49-51页 |
| 第4章 讨论与结论 | 第51-53页 |
| ·讨论 | 第51-52页 |
| ·B细胞抗原表位的预测与验证 | 第51页 |
| ·MRP-1、sspA-1蛋白的表达及纯化技术 | 第51页 |
| ·免疫效力试验分析 | 第51-52页 |
| ·结论 | 第52-53页 |
| 展望 | 第53-54页 |
| 参考文献 | 第54-63页 |
| 致谢 | 第63-64页 |
| 硕士期间发表文章情况 | 第64页 |
