| 中文摘要 | 第1-9页 |
| Abstract | 第9-11页 |
| 前言 | 第11-13页 |
| 材料与方法 | 第13-44页 |
| 实验材料 | 第13-26页 |
| ·实验动物 | 第13页 |
| ·菌株和细胞株 | 第13页 |
| ·质粒载体 | 第13-19页 |
| ·试剂盒 | 第19页 |
| ·工具酶及分子量标准 | 第19页 |
| ·引物序列 | 第19-23页 |
| ·放射性同位素 | 第23页 |
| ·试剂(按试剂公司分类) | 第23-24页 |
| ·主要仪器及设备 | 第24页 |
| ·分析软件 | 第24-26页 |
| 实验方法 | 第26-44页 |
| 1.细胞学实验 | 第26-29页 |
| ·293A细胞、CHO细胞的复苏与培养 | 第26页 |
| ·3T3-L1脂肪前体细胞的培养与分化 | 第26页 |
| ·L6肌肉细胞的培养与分化 | 第26-27页 |
| ·报告基因萤光素酶分析 | 第27-28页 |
| ·2-【~3H】deoxy-glucose吸收的测定 | 第28-29页 |
| 2.重组腺病毒的操作方法 | 第29-31页 |
| ·重组腺病毒的构建与包装 | 第29-30页 |
| ·腺病毒滴度的测定 | 第30-31页 |
| ·腺病毒感染方法 | 第31页 |
| 3.DNA及RNA的提取、目的基因的扩增 | 第31-34页 |
| ·组织及细胞中RNA的分离; | 第31-32页 |
| ·组织总DNA和蛋白质的分离提取 | 第32页 |
| ·总RNA逆转录合成cDNA | 第32-33页 |
| ·从逆转录合成的cDNA或总DNA中扩增目的基因或片段及纯化 | 第33-34页 |
| 4.miRNA的PAGE/Northern印迹杂交 | 第34-36页 |
| ·末端标记法标记探针 | 第34-35页 |
| ·miRNA的PAGE电泳、电转膜、杂交及放射自显影 | 第35-36页 |
| 5.Western印迹 | 第36-39页 |
| ·SDS-PAGE电泳 | 第36-38页 |
| ·转膜 | 第38页 |
| ·Western印迹杂交 | 第38-39页 |
| 6.免疫荧光染色 | 第39-40页 |
| ·试剂 | 第39-40页 |
| ·步骤 | 第40页 |
| 7.Real-Time PCR实验 | 第40-41页 |
| 8.microRNA芯片 | 第41-42页 |
| 9.实验研究方案 | 第42-44页 |
| 实验结果 | 第44-84页 |
| 1.GK与对照组大鼠血糖比较 | 第44页 |
| 2.两组内胰岛素受体(IR)的表达量差异 | 第44-45页 |
| 3.总RNA的提取 | 第45页 |
| 4.MicroRNA芯片分析GK大鼠骨骼肌组织中microRNA表达谱 | 第45-53页 |
| 5.Northern blotting验证差异表达miRNAs | 第53-55页 |
| 6.MiR-29前体序列多态性 | 第55-57页 |
| 7.过量表达miR-29的腺病毒载体的构建与病毒的包装 | 第57-58页 |
| 8.高胰岛素与葡萄糖刺激miR-29的表达 | 第58-60页 |
| 9.miR-29b2-29c与miR-29b1-miR-29a表达元件分析 | 第60-71页 |
| 10.miR-29调节的靶基因验证 | 第71-77页 |
| 11.miR-29的过量表达抑制胰岛素刺激的葡萄糖吸收 | 第77-79页 |
| 12.过表达miR-29抑制胰岛素刺激的Akt的活性,与高胰岛素和高葡萄糖引起的Akt激活受阻一致 | 第79-81页 |
| 13.过量表达miR-29抑制GLUT4向细胞膜的转运 | 第81-84页 |
| 讨论 | 第84-89页 |
| 1.miR-29与2型糖尿病的发生 | 第84-85页 |
| 2.miR-29的靶基因与其功能 | 第85-87页 |
| 3.miR-29的过表达诱导产生胰岛素抵抗效应 | 第87页 |
| 4.未来如何阐明MicroRNAs与2型糖尿病的关 | 第87-89页 |
| 参考文献 | 第89-93页 |
| 附录 | 第93-94页 |
| 小结 | 第94-95页 |
| 综述 | 第95-113页 |
| References | 第107-113页 |
| 攻读博士期间发表和待发表的文章 | 第113-114页 |
| 致谢 | 第114页 |
