| 中文摘要 | 第1-10页 |
| 英文摘要 | 第10-12页 |
| 第一章 前言 | 第12-14页 |
| 第二章 材料与方法 | 第14-33页 |
| ·材料 | 第14-20页 |
| ·菌株 | 第14页 |
| ·质粒 | 第14页 |
| ·细胞株和病毒 | 第14页 |
| ·抗体及转移膜 | 第14页 |
| ·限制性内切酶及其他工具酶 | 第14页 |
| ·试剂盒 | 第14-15页 |
| ·核酸及蛋白分子量标准 | 第15页 |
| ·引物 | 第15-16页 |
| ·主要仪器 | 第16页 |
| ·主要生化试剂 | 第16-17页 |
| ·主要培养基 | 第17页 |
| ·主要溶液 | 第17-20页 |
| ·方法 | 第20-33页 |
| ·报告蛋白IFNα26 基因的克隆 | 第20页 |
| ·不含 Kex2p 酶切位点的IFNα26 基因的克隆 | 第20-21页 |
| ·对Kex2p 酶切位点优化的IFNα26 基因的克隆 | 第21页 |
| ·缺失pro 肽的preIFNα26 融合基因的克隆 | 第21-22页 |
| ·作为pro 肽的大分子蛋白基因的克隆 | 第22-23页 |
| ·重组质粒pPIC9-IFNα26 的构建 | 第23-24页 |
| ·缺失pro 肽的重组质粒pPIC9-preIFNα26 的构建 | 第24-25页 |
| ·大分子蛋白单独分泌表达载体prepro- pPIC9 的构建 | 第25-26页 |
| ·大分子蛋白作为pro 肽与报告蛋白IFNα26 直接融合表达载体的构建 | 第26-27页 |
| ·大分子蛋白作为pro 肽引导报告蛋白IFNα26 分泌表达载体的构建 | 第27-28页 |
| ·巴斯德毕赤酵母菌的电转化 | 第28-29页 |
| ·巴斯德毕赤酵母重组子甲醇利用表型的鉴定 | 第29页 |
| ·巴斯德毕赤酵母转化子在摇瓶里的诱导表达 | 第29页 |
| ·巴斯德毕赤酵母转化子表达上清的TCA 沉淀浓缩 | 第29-30页 |
| ·IFNα26 的N 端氨基酸测序 | 第30页 |
| ·IFNα26 的生物活性测定 | 第30-31页 |
| ·酵母胞内蛋白的提取 | 第31页 |
| ·胞内MBP 的Western-blot 分析 | 第31-32页 |
| ·IFNα26 的ELISA 分析 | 第32-33页 |
| 第三章 实验结果 | 第33-57页 |
| ·报告蛋白IFNα26 基因的克隆 | 第33页 |
| ·不含Kex2p 酶切位点的IFNα26 基因的克隆 | 第33-34页 |
| ·对Kex2p 酶切位点优化的IFNα26 基因的克隆 | 第34-35页 |
| ·缺失pro 肽的preIFNα26 融合基因的克隆 | 第35-36页 |
| ·作为pro 肽的大分子蛋白基因的克隆 | 第36-38页 |
| ·preHSA 融合基因的克隆 | 第36-37页 |
| ·preMBP 融合基因的克隆 | 第37-38页 |
| ·重组质粒pPIC9-IFNα26 的构建 | 第38-39页 |
| ·缺失pro肽的重组质粒pPIC9-preIFNα26的构建 | 第39-40页 |
| ·大分子蛋白单独分泌表达载体pPIC9-prepro 的构建 | 第40-42页 |
| ·pPIC9-preHSA 的构建 | 第40-41页 |
| ·pPIC9-preMBP 的构建 | 第41-42页 |
| ·大分子蛋白作为pro 肽与报告蛋白IFNα26 直接融合表达载体的构建 | 第42-43页 |
| ·大分子蛋白作为pro 肽引导报告蛋白IFNα26 分泌表达载体的构建 | 第43-44页 |
| ·HSA 作为pro 肽引导报告蛋白 IFNα26 分泌表达 Kex2p 酶切位点优化的表达载体的构建 | 第44-45页 |
| ·巴斯德毕赤酵母转化子及甲醇利用表性筛选 | 第45-52页 |
| ·pPIC9-IFNα26 表达克隆的筛选 | 第45页 |
| ·缺失pro 肽的pPIC9-preIFNα26 的表达情况 | 第45-46页 |
| ·pPIC9-preHSA表达克隆的筛选 | 第46-47页 |
| ·pPIC9-preHSAIFNα26 表达克隆的筛选 | 第47-48页 |
| ·pPIC9-preHSA-IFNα26 表达克隆的筛选 | 第48-49页 |
| ·pPIC9-preHSA-IFNα26 Kex2p 酶切位点优化表达克隆的筛选 | 第49-50页 |
| ·preMBP- pPIC9 表达克隆的筛选 | 第50页 |
| ·pPIC9-preMBPIFNα26表达克隆的筛选 | 第50-51页 |
| ·pPIC9-preMBP-IFNα26表达克隆的筛选 | 第51-52页 |
| ·工程菌pPIC9-preMBP-IFNα26/G5115 胞内MBP 的Western-blot 分析 | 第52-53页 |
| ·IFNα26 的N 端氨基酸测序 | 第53-55页 |
| ·MBP 作为pro 肽引导分泌IFNα26 的活性测定 | 第55页 |
| ·MBP 作为pro 肽引导 IFNα26 分泌与αM 信号肽引导 IFNα26 分泌表达SDS-PAGE 对比分析 | 第55-56页 |
| ·MBP 作为pro 肽引导IFNα26 分泌与αMF 信号肽引导IFNα26 分泌表达ELISA 定量分析 | 第56-57页 |
| 第四章 讨论 | 第57-62页 |
| ·酵母中存在两条分泌表达途径 | 第57-58页 |
| ·pro肽在外源蛋白分泌表达中作用 | 第58-59页 |
| ·大分子蛋白作为pro 肽对外源蛋白分泌表达的影响 | 第59-60页 |
| ·巴斯德毕赤酵母菌的转化方法 | 第60-62页 |
| 结论 | 第62-63页 |
| 参考文献 | 第63-67页 |
| 致谢 | 第67-68页 |
| 发表文章 | 第68-73页 |
| 个人简历 | 第73页 |
