| 中文摘要 | 第1-9页 |
| 英文摘要 | 第9-11页 |
| 前言 | 第11-24页 |
| 一、植物病害生防微生物种类 | 第11-15页 |
| （一） 生防细菌 | 第11-12页 |
| （二） 生防放线菌 | 第12-13页 |
| （三） 生防真菌 | 第13-14页 |
| （四） 其他生防微生物 | 第14-15页 |
| 二、芽孢杆菌类生防细菌研究进展 | 第15-22页 |
| （一） 芽孢杆菌抗菌性次生代谢产物 | 第15-16页 |
| （二） 芽孢杆菌抗菌蛋白 | 第16-18页 |
| （三） 抗菌蛋白纯化方法 | 第18-19页 |
| （四） 芽孢杆菌抗菌蛋白基因 | 第19-20页 |
| （五） 芽孢杆菌在生物防治中的应用 | 第20-22页 |
| 三、细菌的种类鉴定 | 第22-23页 |
| （一） 芽孢杆菌属的分类特征 | 第22页 |
| （二） 芽孢杆菌的种类鉴定 | 第22-23页 |
| 四、本研究目的和意义 | 第23-24页 |
| 材料与方法 | 第24-39页 |
| 一、供试菌株 | 第24页 |
| 二、培养基与缓冲液配制 | 第24-25页 |
| 三、主要试剂及仪器 | 第25-26页 |
| （一） 主要试剂 | 第25页 |
| （二） 主要仪器 | 第25-26页 |
| 四、生防菌种类鉴定 | 第26-29页 |
| （一） 分子生物学方法鉴定 | 第26-27页 |
| 1. CTAB 法提取细菌总基因组 DNA | 第26-27页 |
| 2. 16S rDNA 的扩增及测序 | 第27页 |
| （二） 形态特征观察 | 第27-28页 |
| 1. 透射电镜观察 | 第27页 |
| 2. 芽孢染色 | 第27页 |
| 3. 培养特征观察 | 第27-28页 |
| （三） 生理生化特征 | 第28-29页 |
| 1. 革兰氏染色 | 第28页 |
| 2. 需氧性测定 | 第28页 |
| 3. 柠檬酸盐利用试验 | 第28页 |
| 4. 接触酶试验 | 第28页 |
| 5. V-P 试验 | 第28页 |
| 6. 硝酸盐还原试验 | 第28-29页 |
| 7. 淀粉水解 | 第29页 |
| 8. 明胶液化 | 第29页 |
| 9. H_2S产生试验 | 第29页 |
| 10. 丙酸盐利用 | 第29页 |
| 五、抗菌蛋白的分离与纯化 | 第29-32页 |
| （一） 硫酸铵盐析 | 第29页 |
| （二） 脱盐 | 第29-30页 |
| 1. 透析袋预处理 | 第29页 |
| 2. 样品浓缩 | 第29页 |
| 3. 样品脱盐 | 第29-30页 |
| （三） Sepharose Fast Flow 离子交换与Sephadex G-75 凝胶柱层析 | 第30-31页 |
| 1. 凝胶预处理 | 第30页 |
| 2. 装柱 | 第30页 |
| 3. 上样 | 第30页 |
| 4. 洗脱与检测 | 第30-31页 |
| 5. 胶体的再生和保存 | 第31页 |
| （四） 样品蛋白质含量的测定 | 第31-32页 |
| 六、抗菌蛋白理化性质研究 | 第32-37页 |
| （一） 抗菌蛋白组成测定 | 第32-33页 |
| 1. 茚三酮反应 | 第32页 |
| 2. 油红-O 染色液的显色反应 | 第32页 |
| 3. 蒽酮反应 | 第32页 |
| 4. 硝酸反应 | 第32页 |
| 5. 双缩脲反应 | 第32-33页 |
| （二） 抗菌蛋白含糖量测定 | 第33页 |
| （三） 抗菌蛋白分子量测定 | 第33-35页 |
| 1. 电泳缓冲液的配制 | 第33页 |
| 2. 样品的处理 | 第33-34页 |
| 3. 凝胶的配制 | 第34页 |
| 4. 低分子量标准蛋白质 | 第34页 |
| 5. 电泳条件 | 第34-35页 |
| 6. 凝胶板剥离 | 第35页 |
| 7. 染色与脱色 | 第35页 |
| 8. 分子量计算 | 第35页 |
| （四） 抗菌蛋白等电点测定 | 第35-37页 |
| 1. 溶液的配制 | 第35页 |
| 2. 电极缓冲液的配制 | 第35-36页 |
| 3. 凝胶的配制及加样 | 第36页 |
| 4. 灌胶 | 第36页 |
| 5. 电泳 | 第36页 |
| 6. 剥胶 | 第36页 |
| 7. 固定 | 第36页 |
| 8. 测定 | 第36页 |
| 9. pH 标准曲线的制作 | 第36页 |
| 10. pI 计算 | 第36-37页 |
| 七、抗菌蛋白对棉花枯萎病菌的抑制活性测定 | 第37-39页 |
| （一） 对病菌菌丝生长的抑制作用测定 | 第37页 |
| （二） 对病菌菌丝细胞破坏作用的测定 | 第37页 |
| 1. 对菌丝形态破坏的观察 | 第37页 |
| 2. 菌丝相对电导率测定 | 第37页 |
| （三） 对分生孢子产生、萌发和芽管生长的抑制作用测定 | 第37-39页 |
| 结果与分析 | 第39-57页 |
| 一、生防细菌种类鉴定 | 第39-44页 |
| （一） 16SrDNA 序列分析 | 第39-41页 |
| （二） 形态特征 | 第41页 |
| （三） 生理生化特征 | 第41-44页 |
| 1. 培养性状 | 第41-42页 |
| 2. 生理生化反应 | 第42-44页 |
| 二、抗菌蛋白的分离与纯化 | 第44-47页 |
| （一） 粗提蛋白及其抑菌活性 | 第44页 |
| （二） 精提蛋白及其抑菌活性 | 第44-47页 |
| 1. Sepharose Fast Flow 离子交换层析 | 第44-46页 |
| 2. Sephadex G-75 凝胶层析 | 第46-47页 |
| （三） 抗菌蛋白浓度 | 第47页 |
| 三、抗菌蛋白理化性质 | 第47-53页 |
| （一） 抗菌蛋白分子量 | 第47-49页 |
| （二） 抗菌蛋白等电点 | 第49-50页 |
| （三） 抗菌蛋白组成分析 | 第50-53页 |
| 1. 肽键测定（双缩脲反应） | 第50页 |
| 2. α-氨基酸测定（茚三酮反应） | 第50-51页 |
| 3. 芳香族氨基酸测定（硝酸反应） | 第51页 |
| 4. 脂类物质测定（油红-O 染色液的显色反应） | 第51-52页 |
| 5. 糖基测定（蒽酮反应以及含糖量） | 第52-53页 |
| 四、抗菌蛋白对棉花枯萎病菌的抑制作用 | 第53-57页 |
| （一） 对菌丝生长的抑制 | 第53-54页 |
| 1. 对菌丝形态的破坏 | 第53页 |
| 2. 对菌丝细胞膜的破坏 | 第53-54页 |
| （二） 对菌丝细胞的破坏作用 | 第54-55页 |
| （三） 对分生孢子产生、萌发和芽管生长的抑制 | 第55-57页 |
| 讨论 | 第57-61页 |
| 一、生防细菌种类 | 第57页 |
| 二、抗菌蛋白的分离纯化与理化性质 | 第57-58页 |
| 三、抗菌蛋白对棉花枯萎病菌的抑制 | 第58-59页 |
| 四、生防细菌及其抗菌蛋白的应用前景 | 第59-61页 |
| 参考文献 | 第61-69页 |
| 致谢 | 第69-70页 |
