| 摘要 | 第1-13页 |
| ABSTRACT | 第13-16页 |
| 缩略词表 | 第16-18页 |
| 第一章 前言 | 第18-37页 |
| ·课题的提出 | 第18-20页 |
| ·柑橘衰退病国内外研究进展 | 第20-28页 |
| ·柑橘衰退病的危害 | 第20页 |
| ·柑橘衰退病毒的生物学特性 | 第20-22页 |
| ·柑橘衰退病毒的传播和寄主范围 | 第20-21页 |
| ·柑橘衰退病毒的株系分化 | 第21-22页 |
| ·柑橘衰退病毒的分子特性 | 第22-23页 |
| ·柑橘衰退病毒的检测技术 | 第23-25页 |
| ·生物学鉴定 | 第23页 |
| ·柑橘衰退病毒的抗体制备及血清学检测技术的应用 | 第23-25页 |
| ·分子生物学检测 | 第25页 |
| ·柑橘衰退病毒的防治 | 第25-28页 |
| ·CTV的脱除技术 | 第26页 |
| ·弱毒株系的交叉保护 | 第26-27页 |
| ·抗病毒基因工程 | 第27-28页 |
| ·柑橘衰退病毒与寄主互作的研究进展 | 第28-30页 |
| ·柑橘衰退病毒引起的症状特征 | 第29-30页 |
| ·柑橘衰退病毒的细胞病理学研究 | 第30页 |
| ·差异基因筛选方法 | 第30-35页 |
| ·差别筛选 | 第31页 |
| ·mRNA差异显示技术 | 第31-32页 |
| ·基于差减杂交的筛选方法 | 第32页 |
| ·代表性差异分析 | 第32页 |
| ·抑制差减杂交 | 第32页 |
| ·抑制差减杂交方法的原理与技术路线 | 第32-35页 |
| ·SSH技术的基本原理 | 第32-33页 |
| ·SSH的主要技术流程 | 第33-34页 |
| ·SSH技术的优缺点评价 | 第34-35页 |
| ·本研究的目的与内容 | 第35-37页 |
| 第二章 CTV抗体制备及检测效果分析 | 第37-68页 |
| ·前言 | 第37-38页 |
| ·材料与方法 | 第38-46页 |
| ·抗体、细胞及免疫动物 | 第38页 |
| ·植物材料 | 第38页 |
| ·主要试剂 | 第38页 |
| ·毒源材料的确定 | 第38-40页 |
| ·病毒提纯 | 第40-42页 |
| ·病毒提纯方法 | 第40-41页 |
| ·病毒提纯效果分析 | 第41-42页 |
| ·多克隆抗体制备 | 第42-43页 |
| ·免疫方案 | 第42页 |
| ·抗血清的收集和保存 | 第42页 |
| ·多克隆抗体的纯化 | 第42-43页 |
| ·单克隆抗体制备 | 第43-45页 |
| ·小鼠免疫 | 第43页 |
| ·SP2/0骨髓瘤细胞的活化及瘤细胞的制备 | 第43页 |
| ·免疫脾细胞的制备 | 第43页 |
| ·饲养细胞的制备 | 第43-44页 |
| ·细胞融合 | 第44页 |
| ·分泌抗CTV抗体杂交瘤细胞株的筛选 | 第44页 |
| ·杂交瘤细胞的克隆化培养 | 第44-45页 |
| ·抗体的检测应用及检测效果分析 | 第45-46页 |
| ·PAS-ELISA法 | 第45页 |
| ·斑点免疫印迹法 | 第45-46页 |
| ·直接组织印迹法 | 第46页 |
| ·三抗体夹心ELISA法 | 第46页 |
| ·结果与分析 | 第46-66页 |
| ·毒源材料的确定 | 第46-48页 |
| ·不同柑橘样品CTV的PAS-ELISA检测结果 | 第46页 |
| ·不同时期采集柑橘样品CTV的PAS-ELISA检测效果 | 第46-47页 |
| ·柑橘不同组织CTV的PAS-ELISA检测效果 | 第47-48页 |
| ·柑橘样品CTV的RT-PCR检测结果 | 第48页 |
| ·病毒提纯及提纯效果分析 | 第48-53页 |
| ·蔗糖密度梯度和硫酸铯密度梯度离心后CTV在离心管中的分布 | 第48-51页 |
| ·提纯病毒粒子的形态观察 | 第51页 |
| ·两种方法提纯病毒的SDS-PAGE检测和Western blot分析 | 第51-52页 |
| ·两种方法提纯病毒的纯度和产量比较 | 第52-53页 |
| ·多克隆抗体的效价及检测应用 | 第53-58页 |
| ·多克隆抗体的效价 | 第53-54页 |
| ·多克隆抗体的Western blot分析 | 第54页 |
| ·PAS-ELISA检测的最适条件 | 第54-56页 |
| ·PAS-ELISA检测田间柑橘样品CTV的结果 | 第56-57页 |
| ·DIBA和DTBIA法检测的适宜条件及其检测田间柑橘样品CTV的结果 | 第57-58页 |
| ·单克隆抗体的性质及检测效果分析 | 第58-66页 |
| ·分泌抗CTV抗体杂交瘤细胞株的筛选结果 | 第58页 |
| ·单克隆抗体的效价 | 第58-59页 |
| ·单克隆抗体类型及亚类鉴定结果 | 第59页 |
| ·单克隆抗体的Western blot分析 | 第59-60页 |
| ·TAS-ELISA法检测的最适条件及检测灵敏度 | 第60-62页 |
| ·TAS-ELISA检测田间柑橘样品CTV的结果 | 第62-63页 |
| ·DIBA法检测的检测灵敏度及检测田间柑橘样品CTV的效果 | 第63-64页 |
| ·PAS-ELISA法和TAS-ELISA法检测效果比较 | 第64-65页 |
| ·4株单克隆抗体对不同来源柑橘样品CTV的初步鉴定 | 第65-66页 |
| ·讨论 | 第66-68页 |
| ·毒源材料的确定 | 第66页 |
| ·病毒提纯 | 第66页 |
| ·抗体制备及检测效果分析 | 第66-68页 |
| 第三章 CTV分离物HB1的血清学性状及其CP基因的分子特性 | 第68-89页 |
| ·前言 | 第68-69页 |
| ·材料与方法 | 第69-74页 |
| ·植物材料、病毒分离物及抗体 | 第69页 |
| ·质粒、菌株及主要试剂 | 第69页 |
| ·CTV-HB1的生物学鉴定 | 第69-70页 |
| ·CTV-HB1的血清学特性 | 第70页 |
| ·CTV-HB1 CP基因的RFLP分析 | 第70-71页 |
| ·总RNA的提取 | 第70页 |
| ·引物设计 | 第70页 |
| ·RT-PCR检测 | 第70-71页 |
| ·CTV-HB1 CP基因的PCR-RFLP分析 | 第71页 |
| ·CTV-HB1 CP基因的克隆、PCR-SSCP分析、测序及序列分析 | 第71-73页 |
| ·DNA片段的回收与纯化 | 第71页 |
| ·CP基因克隆 | 第71页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的制备及转化 | 第71-72页 |
| ·质粒DNA的小量制备和纯化 | 第72页 |
| ·HB1-CTV CP基因的PCR-SSCP分析 | 第72页 |
| ·HB1-CTV CP基因的序列测定与分析 | 第72-73页 |
| ·原核表达载体的构建及表达产物的检测和Western blot分析 | 第73-74页 |
| ·原核表达载体的构建 | 第73页 |
| ·原核表达 | 第73页 |
| ·SDS-PAGE电泳检测 | 第73-74页 |
| ·CTV-HB1重组外壳蛋白的Western blot分析 | 第74页 |
| ·结果与分析 | 第74-86页 |
| ·CTV-HB1的血清学特性 | 第74-75页 |
| ·CTV-HB1在指示植物上的症状表现 | 第75页 |
| ·CTV-HB1 CP基因的RFLP分析结果 | 第75-77页 |
| ·总RNA的质量检测 | 第75-76页 |
| ·CTV-HB1的RT-PCR检测结果 | 第76-77页 |
| ·CTV-HB1 CP基因的PCR-RFLP分析 | 第77页 |
| ·CTV-HB1 CP基因的SSCP分析及序列测定 | 第77-79页 |
| ·CTV-HB1 CP基因的克隆 | 第77-78页 |
| ·CTV-HB1 CP基因的SSCP分析 | 第78-79页 |
| ·CTV-HB1 CP基因的序列测定及分析 | 第79页 |
| ·原核表达及表达产物的检测和Western blot分析 | 第79-81页 |
| ·原核表达载体构建 | 第79-80页 |
| ·CTV-HB1 CP基因在E.coli中的诱导表达 | 第80页 |
| ·E.coli中诱导表达CTV-HB1重组外壳蛋白的Western blot分析 | 第80-81页 |
| ·不同来源抗体检测CTV-HB1重组外壳蛋白和提纯病毒蛋白的Western blot分析 | 第81-82页 |
| ·序列分析及可能抗原表位的推测 | 第82-86页 |
| ·讨论 | 第86-89页 |
| ·我国发生CTV分离物的血清学特性 | 第87页 |
| ·CTV-HB1 CP基因的PCR扩增和克隆 | 第87页 |
| ·CTV-HB1重组外壳蛋白的诱导表达和Western blot分析 | 第87-88页 |
| ·序列分析及可能抗原表位的推测 | 第88-89页 |
| 第四章 柑橘衰退病毒对离体培养柑橘生长发育的影响 | 第89-107页 |
| ·前言 | 第89-90页 |
| ·材料和方法 | 第90-94页 |
| ·植物材料、病毒分离物及抗体 | 第90页 |
| ·主要试剂 | 第90页 |
| ·生物学症状观察 | 第90-91页 |
| ·植物组织来源及外植体的准备 | 第91页 |
| ·培养基制备和培养条件 | 第91页 |
| ·柑橘离体培养适宜培养基的筛选 | 第91-92页 |
| ·启动培养基的筛选 | 第91页 |
| ·继代培养基的筛选 | 第91页 |
| ·生根培养基的筛选 | 第91-92页 |
| ·柑橘离体植株的再生及移栽 | 第92页 |
| ·茎段培养 | 第92页 |
| ·生根培养 | 第92页 |
| ·驯化和移栽 | 第92页 |
| ·不同培养时期柑橘离体植株中CTV的效价测定 | 第92-93页 |
| ·TAS-ELISA检测 | 第92页 |
| ·IC-RT- PCR检测 | 第92-93页 |
| ·不同培养时期柑橘离体植株中CTV的嫁接传染力测定 | 第93-94页 |
| ·数据统计分析 | 第94页 |
| ·结果与分析 | 第94-104页 |
| ·CTV-YC在不同指示植物上的生物学症状表现 | 第94页 |
| ·不同柑橘品种适宜培养基的筛选 | 第94-98页 |
| ·启动培养基对不同柑橘品种茎段初代培养腋芽萌发的影响 | 第94-96页 |
| ·继代培养基对不同柑橘品种离体植株增殖的影响 | 第96-97页 |
| ·生根培养基对不同柑橘品种离体植株生根的影响 | 第97-98页 |
| ·CTV对离体培养柑橘生长发育的影响 | 第98-100页 |
| ·CTV-YC对来自幼年态柑橘离体植株生长发育的影响 | 第98-100页 |
| ·CTV对来自成年态柑橘离体植株生长发育的影响 | 第100页 |
| ·CTV-YC对来自幼年态柑橘离体植株生根的影响 | 第100-101页 |
| ·柑橘离体植株中CTV效价的变化动态 | 第101-104页 |
| ·不同培养时期柑橘离体植株中CTV的TAS-ELISA检测结果 | 第101-102页 |
| ·不同培养时期柑橘离体植株中CTV-YC的IC-RT-PCR检测结果 | 第102-104页 |
| ·柑橘离体植株中CTV嫁接传染力的变化动态 | 第104页 |
| ·讨论 | 第104-107页 |
| ·柑橘离体组织培养体系的建立 | 第104-105页 |
| ·CTV对离体培养柑橘生长发育和生根的影响 | 第105页 |
| ·柑橘离体植株中CTV效价和嫁接传染力的变化动态 | 第105-107页 |
| 第五章 CTV诱导墨西哥来檬差异表达基因的鉴定与分析 | 第107-143页 |
| ·前言 | 第107-108页 |
| ·材料与方法 | 第108-118页 |
| ·实验材料及处理 | 第108页 |
| ·主要试剂及试剂盒 | 第108页 |
| ·总RNA的提取及mRNA的分离 | 第108-110页 |
| ·抑制差减杂交 | 第110-114页 |
| ·第一链cDNA合成 | 第110-111页 |
| ·第二链cDNA合成 | 第111页 |
| ·RsaⅠ酶切 | 第111-112页 |
| ·接头连接 | 第112-113页 |
| ·差减杂交 | 第113页 |
| ·两次PCR选择性扩增 | 第113-114页 |
| ·差减文库生成 | 第114页 |
| ·差减文库筛选 | 第114-116页 |
| ·插入片段的扩增及反向Northern斑点杂交膜的制备 | 第114-115页 |
| ·反向Northern斑点杂交 | 第115-116页 |
| ·差异表达克隆选取 | 第116页 |
| ·序列同源性检索 | 第116页 |
| ·差异表达片段的Northern杂交验证 | 第116-118页 |
| ·Northern杂交膜的制备 | 第116-117页 |
| ·Northern杂交步骤 | 第117-118页 |
| ·结果与分析 | 第118-140页 |
| ·差减文库构建 | 第118-124页 |
| ·Tester和Driver样品总RNA质量检测 | 第118页 |
| ·mRNA质量检测 | 第118-119页 |
| ·cDNA合成检测结果 | 第119页 |
| ·接头连接及连接效率检测 | 第119-120页 |
| ·差减杂交产物的选择性PCR扩增结果 | 第120-121页 |
| ·差减文库插入片段的PCR检测 | 第121-124页 |
| ·部分差异表达片段的Northern杂交验证 | 第124-126页 |
| ·差异表达片段的序列分析及功能分类 | 第126-140页 |
| ·差异表达片段的序列分析 | 第126-139页 |
| ·差异表达片段的基因功能分类 | 第139-140页 |
| ·讨论与小结 | 第140-143页 |
| 参考文献 | 第143-166页 |
| 附录A:主要试剂及溶液的配制 | 第166-170页 |
| 附录B:PET-28载体信息 | 第170-171页 |
| 附录C:差减文库所用接头和引物信息 | 第171-172页 |
| 附录D:博士在读期间已发表或已接受文章 | 第172-173页 |
| 致谢 | 第173页 |
