| 摘要 | 第1-5页 |
| ABSTRACT | 第5-8页 |
| 第1章 文献综述 | 第8-15页 |
| ·β－胡萝卜素羟化酶基因和β－胡萝卜素羟化酶 | 第8-10页 |
| ·β－胡萝卜素羟化酶基因 | 第8-9页 |
| ·冬胡萝卜素羟化酶 | 第9-10页 |
| ·β－胡萝卜素羟化酶基因的表达调控 | 第10-11页 |
| ·β－胡萝卜素羟化酶及其催化产物的生物功能 | 第11-13页 |
| ·β－胡萝卜素羟化酶的催化产物 | 第11-12页 |
| ·β－胡萝卜素羟化酶在类胡萝卜素代谢途径中的位置 | 第12页 |
| ·β－胡萝卜素羟化酶的作用机理 | 第12-13页 |
| ·β－胡萝卜素羟化酶基因的克隆表达及应用 | 第13-14页 |
| ·小结 | 第14-15页 |
| 第2章 材料与方法 | 第15-28页 |
| ·材料、仪器和试剂 | 第15-18页 |
| ·实验材料 | 第15页 |
| ·仪器和设备 | 第15页 |
| ·试剂和溶液 | 第15-18页 |
| ·实验方法 | 第18-28页 |
| ·引物的设计 | 第18-21页 |
| ·DNA的提取及检测 | 第21页 |
| ·PCR反应体系的建立及产物分析 | 第21-23页 |
| ·模板用量的确立 | 第21-22页 |
| ·四对引物的 PCR退火温度的确定 | 第22-23页 |
| ·PCR循环设置 | 第23页 |
| ·2%琼脂糖凝胶电泳检测PCR结果 | 第23页 |
| ·PCR产物的割胶回收纯化 | 第23-24页 |
| ·割胶纯化的PCR产物与T-载体连接，构建重组体 | 第24页 |
| ·选择性培养基的制备 | 第24-25页 |
| ·用重组质粒转化细菌 | 第25页 |
| ·菌落PCR及克隆子的筛选 | 第25-26页 |
| ·质粒的提取 | 第26页 |
| ·测序 | 第26-28页 |
| 第3章 实验结果 | 第28-60页 |
| ·南丰密橘β-胡萝卜素羟化酶基因的克隆 | 第28-48页 |
| ·基因组DNA提取结果 | 第28-29页 |
| ·PCR反应体系的优化结果 | 第29页 |
| ·PCR体系中模板量的优化 | 第29页 |
| ·PCR体系中退火温度的优化 | 第29页 |
| ·最佳反应条件下的扩增产物的检测 | 第29页 |
| ·PCR产物的割胶纯化,连接及转化结果 | 第29-30页 |
| ·氨苄青霉素平板筛选转化子及菌落PCR检测阳性克隆子 | 第30-33页 |
| ·质粒的提取结果 | 第33页 |
| ·测序结果及序列分析 | 第33-48页 |
| ·测序原始结果 | 第33-45页 |
| ·DNAstar序列自动拼接结果 | 第45-48页 |
| ·南丰密橘β－胡萝卜素羟化酶基因及蛋白序列分析 | 第48-60页 |
| ·南丰密橘β－胡萝卜素羟化酶基因结构的分析 | 第48-55页 |
| ·南丰密橘β－胡萝卜素羟化酶蛋白结构的分析 | 第55-60页 |
| 第4章 讨论 | 第60-64页 |
| ·β－胡萝卜素羟化酶目前研究状况 | 第60-61页 |
| ·β－胡萝卜素羟化酶的作用机制 | 第61-62页 |
| ·β－胡萝卜素羟化酶表达的调控机制 | 第62-63页 |
| ·β－胡萝卜素羟化酶在类胡萝卜素生产中的利用前景 | 第63页 |
| ·其他具有β－胡萝卜素羟化活性的酶 | 第63-64页 |
| 致谢 | 第64-65页 |
| 参考文献 | 第65-69页 |
| 攻读学位期间的研究成果 | 第69页 |