| 摘要 | 第1-7页 |
| Abstract | 第7-12页 |
| 前言 | 第12-31页 |
| 1 研究背景 | 第12-23页 |
| ·血栓性疾病的形成和治疗 | 第12-16页 |
| ·血栓性疾病及其危害 | 第12页 |
| ·血栓的形成及分类 | 第12-13页 |
| ·血栓形成机制:凝血系统与纤溶系统 | 第13-16页 |
| ·血栓性疾病的治疗方法 | 第16页 |
| ·溶栓药物的研究现状及前景 | 第16-18页 |
| ·天然来源溶栓剂及其基因表达研究进展 | 第18-23页 |
| ·动物来源纤溶酶 | 第19-22页 |
| ·植物来源纤溶酶 | 第22页 |
| ·微生物来源纤溶酶 | 第22-23页 |
| ·海洋生物来源的纤溶酶 | 第23页 |
| 2. 巴斯德毕赤酵母表达系统研究进展 | 第23-26页 |
| ·巴斯德毕赤酵母表达外源蛋白的优势 | 第24-25页 |
| ·巴斯德毕赤酵母常用宿主菌 | 第25-26页 |
| ·巴斯德毕赤酵母表达载体 | 第26页 |
| 3 解脂耶氏酵母表达系统研究进展 | 第26-29页 |
| ·解脂耶氏酵母表达外源蛋白的优势 | 第27页 |
| ·解脂耶氏酵母常用宿主菌 | 第27-28页 |
| ·解脂耶氏酵母表达载体 | 第28-29页 |
| 4. 单环刺螠及其体内活性成分的研究 | 第29-30页 |
| 5. 立题依据及研究目的 | 第30-31页 |
| 第一章 单环刺螠纤溶酶Ⅱ基因的克隆 | 第31-52页 |
| 1 材料和方法 | 第31-41页 |
| ·实验材料及试剂 | 第31页 |
| ·培养基 | 第31页 |
| ·方法 | 第31-41页 |
| ·蛋白质测序 | 第31页 |
| ·单环刺螠总RNA提取 | 第31-32页 |
| ·cDNA第一链的合成 | 第32-33页 |
| ·简并PCR扩增目的片段 | 第33-36页 |
| ·5’RACE-PCR获得ufe Ⅱ基因5’末端序列 | 第36-40页 |
| ·单环刺螠纤溶酶Ⅱ基因(ufe Ⅱ)全长扩增 | 第40-41页 |
| ·生物信息学分析 | 第41页 |
| 2 结果与讨论 | 第41-52页 |
| ·单环刺螠总RNA提取 | 第41-42页 |
| ·简并引物PCR扩增 | 第42-43页 |
| ·5’RACE PCR | 第43页 |
| ·单环刺螠纤溶酶Ⅱ基因(ufe Ⅱ)全长cDNA扩增 | 第43-44页 |
| ·单环刺螠纤溶酶Ⅱ信号肽预测 | 第44-47页 |
| ·单环刺螠纤溶酶Ⅱ结构域及活性位点分析 | 第47-48页 |
| ·多序列比对及系统进化分析 | 第48-50页 |
| ·单环刺螠纤溶酶Ⅱ分子量预测 | 第50-52页 |
| 第二章 单环刺螠纤溶酶Ⅱ基因在巴斯德毕赤酵母中的表达 | 第52-69页 |
| 1 材料和方法 | 第52-63页 |
| ·菌株和质粒 | 第52页 |
| ·酶及生化试剂 | 第52页 |
| ·培养基 | 第52-53页 |
| ·方法 | 第53-63页 |
| ·表达载体构建 | 第53-56页 |
| ·巴斯德毕赤酵母X-33感受态的制备及电转化 | 第56-57页 |
| ·转化巴斯德毕赤酵母X-33阳性克隆检测 | 第57-58页 |
| ·pPICZaA-ufe Ⅱ-P1,pPICZaA-ufe Ⅱ-P2在巴斯德毕赤酵母X-33中的诱导表达 | 第58-59页 |
| ·纤溶酶活性检测 | 第59-60页 |
| ·SDS-PAGE电泳检测 | 第60-62页 |
| ·免疫印迹(Western blotting)鉴定 | 第62-63页 |
| ·ufeⅡ基因在巴斯德毕赤酵母SMD1168中的表达 | 第63页 |
| 2. 结果与讨论 | 第63-69页 |
| ·pPICZaA-ufeⅡ-P1,pPICZaA-ufe Ⅱ-P2表达载体的构建 | 第63-66页 |
| ·单环刺螠纤溶酶Ⅱ基因在巴斯德毕赤酵母X-33中的表达 | 第66-67页 |
| ·阳性克隆筛选 | 第66页 |
| ·诱导表达及酶活力测定 | 第66页 |
| ·SDS-PAGE和免疫印迹鉴定 | 第66-67页 |
| ·单环刺螠纤溶酶Ⅱ基因在巴斯德毕赤酵母SMD1168中的表达 | 第67-69页 |
| 第三章 单环刺螠纤溶酶Ⅱ基因在解脂耶氏酵母中的表达 | 第69-78页 |
| 1 材料和方法 | 第69-73页 |
| ·菌株和质粒 | 第69-70页 |
| ·酶及生化试剂 | 第70页 |
| ·培养基 | 第70页 |
| ·方法 | 第70-73页 |
| ·表达载体构建 | 第70-72页 |
| ·Y.lipolytica Polh感受态细胞的制备和转化 | 第72-73页 |
| ·阳性转化子筛选 | 第73页 |
| 2. 结果与讨论 | 第73-78页 |
| ·pINA 1317-ufe Ⅱ-Y1,pINA 1317-ufe Ⅱ-Y2表达载体的构建 | 第73-77页 |
| ·单环刺螠纤溶酶Ⅱ基因Y. lipolytica Po1h中的表达 | 第77-78页 |
| ·诱导表达及酶活力测定 | 第77页 |
| ·SDS-PAGE和免疫印迹鉴定 | 第77-78页 |
| 总结 | 第78-79页 |
| 参考文献 | 第79-85页 |
| 致谢 | 第85-86页 |
| 个人简历 | 第86页 |
| 发表的学术论文 | 第86页 |
