| 摘要 | 第1-5页 |
| ABSTRACT | 第5-10页 |
| 第一章 质粒制备 | 第10-16页 |
| ·培养细菌 | 第10-11页 |
| ·细菌的收获与裂解 | 第11-12页 |
| ·质粒的纯化 | 第12-13页 |
| ·质粒纯度的检测 | 第13-16页 |
| 第二章 PCV2 与DNA 疫苗 | 第16-25页 |
| ·PCV2 研究概况 | 第16-20页 |
| ·一般生物学特征 | 第16页 |
| ·分子生物学特征 | 第16-17页 |
| ·PCV2 相关疾病 | 第17-18页 |
| ·致病机理 | 第18-19页 |
| ·诊断 | 第19-20页 |
| ·防治 | 第20页 |
| ·DNA 疫苗概况 | 第20-25页 |
| ·DNA 疫苗的历史 | 第21页 |
| ·DNA 疫苗的作用机理 | 第21-22页 |
| ·DNA 疫苗的构建 | 第22页 |
| ·DNA 疫苗的免疫方法 | 第22-23页 |
| ·DNA 疫苗免疫佐剂 | 第23页 |
| ·DNA 疫苗安全性评价 | 第23-25页 |
| 第三章 质粒制备方法的建立 | 第25-33页 |
| ·材料 | 第25-26页 |
| ·试剂 | 第25页 |
| ·主要仪器 | 第25页 |
| ·药品及溶液的配制 | 第25-26页 |
| ·实验方法 | 第26-29页 |
| ·质粒的转化 | 第26-27页 |
| ·重组细菌的大量培养 | 第27页 |
| ·细菌的收获 | 第27页 |
| ·细菌的裂解 | 第27-28页 |
| ·质粒DNA 的提取及纯化 | 第28页 |
| ·琼脂糖凝胶电泳 | 第28-29页 |
| ·质粒DNA 纯度和含量的分析 | 第29页 |
| ·转化效果的比较 | 第29页 |
| ·结果 | 第29-31页 |
| ·工程菌培养的效果 | 第29页 |
| ·500 mL 菌液抽提时加入溶液Ⅰ、溶液Ⅱ、溶液Ⅲ的体积对提取效果的影响 | 第29-30页 |
| ·RNase A 的作用时间对提取效果的影响 | 第30页 |
| ·酶切及琼脂糖凝胶电泳结果 | 第30-31页 |
| ·质粒DNA 的纯度及含量分析 | 第31页 |
| ·转化效果 | 第31页 |
| ·讨论 | 第31-33页 |
| 第四章 PCV2 DNA 疫苗对小鼠的免疫效应 | 第33-43页 |
| ·材料与方法 | 第33-38页 |
| ·菌种、细胞和动物 | 第33页 |
| ·主要试剂 | 第33-34页 |
| ·主要仪器设备 | 第34页 |
| ·主要试剂的配制 | 第34-35页 |
| ·真核表达系统pMD-T-ORF2 的构建 | 第35-37页 |
| ·质粒pMD-T-ORF2 的提取 | 第37页 |
| ·小鼠的免疫 | 第37页 |
| ·间接ELISA 法检测PCV2 DNA 疫苗引发特异性抗体效价 | 第37页 |
| ·小鼠脾T 淋巴细胞的制备 | 第37页 |
| ·淋巴细胞增殖反应 | 第37-38页 |
| ·自然杀伤细胞(NK)活性 | 第38页 |
| ·脾淋巴细胞细胞亚群的测定 | 第38页 |
| ·结果 | 第38-41页 |
| ·重组质粒诱导小鼠产生的特异性抗体反应 | 第38-39页 |
| ·免疫小鼠脾脏淋巴细胞的增殖反应 | 第39-40页 |
| ·重组质粒免疫小鼠NK 细胞的杀伤活性检测 | 第40页 |
| ·小鼠脾脏中淋巴细胞各亚群含量的分析 | 第40-41页 |
| ·讨论 | 第41-43页 |
| 结论 | 第43-44页 |
| 参考文献 | 第44-51页 |
| 缩略词 | 第51-52页 |
| 附录 | 第52-53页 |
| 致谢 | 第53-54页 |
| 个人简历 | 第54页 |