第一章 文献回顾 | 第1-29页 |
一、转化生长因子-β超家族及其信号传导通路 | 第9-14页 |
1.TGF-β超家族成员的受体 | 第9-10页 |
2.受体下游的信号分子—Smad | 第10-11页 |
3.由Smad介导的细胞内信号传导通路 | 第11-14页 |
二、激活素及激活素受体相互作用蛋白 | 第14-20页 |
1.激活素及其受体 | 第14-17页 |
2.激活素生物学效应 | 第17-18页 |
3.激活素受体相互作用蛋白及其在激活素信号传导中的作用 | 第18-20页 |
三、激活素的生理功能及其临床意义 | 第20-25页 |
1.激活素在机体不同组织器官的作用 | 第20-23页 |
2.激活素与炎症和机体急性期反应的关系 | 第23-24页 |
3.激活素在病理创伤中的作用 | 第24-25页 |
四、本课题主要研究技术内容的国内外发展现状与趋势 | 第25-29页 |
1.本课题研究目的和具体内容 | 第26-27页 |
2.本项目的特色 | 第27-29页 |
英文词表 | 第29-30页 |
第二章 材料与方法 | 第30-52页 |
一、实验动物 | 第30页 |
二、主要试剂 | 第30页 |
三、试剂配制 | 第30-33页 |
四、主要仪器 | 第33-34页 |
五、主要方法 | 第34-52页 |
1.ActRIP3基因克隆 | 第34页 |
2.质粒构建 | 第34-38页 |
3.GST-ActRIP3融合蛋白表达及抗ActRIP3抗体制备 | 第38-40页 |
4.ActRIP3和激活素ⅡA型受体间的相互作用实验 | 第40-43页 |
5.ActRIP3的组织学分布 | 第43-44页 |
6.ActRIP3的细胞内表达格局及天然成熟蛋白的表达 | 第44-46页 |
7.ActRIP3促进激活素应答的基因转录分析 | 第46页 |
8.在巨噬细胞中过表达ActRIP3对NO及IL-1 β分泌的影响 | 第46-49页 |
9.小鼠腹腔巨噬细胞ActRIP3基因被沉默后对NO分泌的影响 | 第49-50页 |
10.流式细胞仪分析过表达ActRIP3对巨噬细胞表面ActRⅡA受体表达的影响 | 第50-51页 |
11.统计学处理: | 第51-52页 |
采用t检验进行统计学分析。 | 第51-52页 |
第三章 结果 | 第52-67页 |
一、ActRIP3基因克隆和序列分析 | 第52-53页 |
二、GST融合蛋白的诱导表达及纯化 | 第53页 |
三、抗GST-ActRIP3多克隆抗体的制备与纯化 | 第53-55页 |
四、ActRIP3与ActRⅡA的相互作用 | 第55-57页 |
1.哺乳动物细胞双杂交实验分析ActRIP3和ActRⅡA相互作用 | 第55页 |
2.PULL-DOWN实验分析ActRIP3和天然激活素ⅡA型受体间的相互作用 | 第55-56页 |
3.免疫沉淀分析ActRIP3与ActRⅡA的相互作用 | 第56-57页 |
五、ActRIP3在小鼠组织中的表达 | 第57-60页 |
1.ActRIP3 mRNA在小鼠组织中的表达 | 第57-58页 |
2.ActRIP3蛋白在小鼠组织中的表达 | 第58-60页 |
六、ActRIP3的细胞内表达格局及天然成熟蛋白的表达 | 第60-62页 |
1.ActRIP3的细胞内表达格局 | 第60页 |
2.Western杂交分析天然成熟的ActRIP3的表达及分子量 | 第60-62页 |
七、ActRIP3促进激活素应答的信号传导 | 第62页 |
八、过表达ActRIP3对小鼠巨噬细胞功能的影响 | 第62-64页 |
九、ActRIP3基因沉默对小鼠腹腔巨噬细胞NO分泌的影响 | 第64-65页 |
十、过表达ActRIP3促进巨噬细胞表面ActRⅡA受体表达 | 第65-67页 |
讨论 | 第67-81页 |
一、激活素受体相互作用蛋白3(ActRIP3)的发现及其与ActRIP1,ActRIP3基因结构比较 | 第67-68页 |
二、ActRIP3的组织学分布及可能的生物学作用 | 第68-69页 |
三、ActRIPs在激活素信号传导中的意义 | 第69-71页 |
四、其他调节激活素信号传导的影响因子 | 第71-73页 |
五、激活素信号传导的研究对于激活素生物学作用的意义 | 第73-74页 |
六、蛋白质相互作用研究技术 | 第74-77页 |
1.双杂交系统 | 第74页 |
2.免疫共沉淀技术 | 第74页 |
3.Pull-down实验 | 第74-77页 |
七、蛋白相互作用图谱的绘制 | 第77-81页 |
小结 | 第81-82页 |
参考文献 | 第82-91页 |
攻读博士期间主要学术成果 | 第91-93页 |
中文摘要 | 第93-98页 |
ABSTRACT | 第98-104页 |
致谢 | 第104页 |