| 摘要 | 第1-13页 |
| Abstract | 第13-16页 |
| 第一章 文献综述 | 第16-42页 |
| 第1节 鱼类性别和性染色 | 第16-30页 |
| 1 鱼类性别 | 第16-17页 |
| 2 鱼类的性染色体类型 | 第17-19页 |
| ·XY型 | 第17页 |
| ·ZW型 | 第17页 |
| ·XO型 | 第17-18页 |
| ·ZO型 | 第18页 |
| ·复性染色体型 | 第18-19页 |
| ·常染色体型 | 第19页 |
| 3 性染色体的识别 | 第19-22页 |
| ·通过遗传标记研究,判断性决定体系 | 第19-20页 |
| ·通过诱导性逆转,来判断其性决定体系 | 第20页 |
| ·通过染色体的形态差异,来判断性决定体系 | 第20-21页 |
| ·通过染色体带型差异,来判断性决定体系 | 第21页 |
| ·种间杂交,来判断性决定体系 | 第21页 |
| ·人工诱导鱼类单性发育,来判断性决定体系 | 第21-22页 |
| ·通过分子标记,来判断性决定体系 | 第22页 |
| 4 鱼类性染色体的基本特征 | 第22-24页 |
| 5 遗传性别决定和环境性别决定 | 第24-30页 |
| ·遗传性别决定(GSD) | 第24-25页 |
| ·环境性别决定型(ESD) | 第25-28页 |
| ·温度对鱼类性别的影响 | 第25-26页 |
| ·激素对鱼类性别的影响 | 第26-28页 |
| ·遗传性别决定与温度依赖性性别决定关系 | 第28-30页 |
| 第2节 鱼类性别决定的分子遗传学研究概况 | 第30-42页 |
| 1 性别分子遗传基础研究 | 第30页 |
| 2 鱼类性染色体 | 第30-32页 |
| 3 性别决定机制假说 | 第32-34页 |
| 4 鱼类中可能的性别相关基因 | 第34-38页 |
| ·BKM(Banded kraint minor)卫星DNA | 第34页 |
| ·重复序列 | 第34-35页 |
| ·ZFY | 第35页 |
| ·H-Y抗原 | 第35页 |
| ·SRY | 第35-36页 |
| ·SOX基因家族 | 第36页 |
| ·DMY | 第36-37页 |
| ·DMRT1 | 第37-38页 |
| 5 性染色体特异片段与性别遗传鉴定 | 第38页 |
| 6 鱼类性别决定的分子基础研究的意义 | 第38-40页 |
| ·对脊椎动物进化生物学的意义 | 第39页 |
| ·对于鱼类性别控制育种的意义 | 第39-40页 |
| ·对环境生物学的意义 | 第40页 |
| 7 本研究的目的和意义 | 第40-42页 |
| 第二章 尼罗罗非鱼Dmrt基因克隆和不同组织中的表达 | 第42-72页 |
| 1 前言 | 第42页 |
| 2 材料与方法 | 第42-55页 |
| ·实验材料 | 第42页 |
| ·引物 | 第42-43页 |
| ·药品和试剂 | 第43-45页 |
| ·菌株和质粒 | 第43页 |
| ·主要化学试剂 | 第43-44页 |
| ·培养基的配制 | 第44页 |
| ·有关质粒DNA提取的溶液配制 | 第44页 |
| ·常用缓冲液及试剂的配制 | 第44-45页 |
| ·基因组DNA提取 | 第45-46页 |
| ·RNA提取 | 第46-47页 |
| ·cDNA合成 | 第47-48页 |
| ·第一链cDNA的合成 | 第47页 |
| ·SMARTcDNA的引物延伸合成 | 第47-48页 |
| ·DM-domain区的扩增 | 第48页 |
| ·PCR产物的克隆 | 第48-51页 |
| ·PCR产物的回收 | 第48-49页 |
| ·连接反应 | 第49-50页 |
| ·转化(氯化钙法) | 第50-51页 |
| ·重组克隆的鉴定 | 第51-52页 |
| ·阳性克隆的筛选鉴定 | 第51页 |
| ·碱解法小量提取质粒DNA | 第51-52页 |
| ·PCR鉴定 | 第52页 |
| ·SSCP分型 | 第52-53页 |
| ·阳性克隆的序列分析 | 第53页 |
| ·3’-RACE | 第53-54页 |
| ·RACE产物的克隆 | 第54页 |
| ·不同组织RT-PCR反应 | 第54-55页 |
| 3 结果 | 第55-68页 |
| ·总RNA完整性的检测 | 第55-56页 |
| ·cDNA的合成 | 第56-57页 |
| ·DM-domain区的扩增 | 第57页 |
| ·DM-domain克隆产物的鉴定 | 第57页 |
| ·SSCP分析 | 第57-58页 |
| ·序列分析 | 第58-62页 |
| ·Dmrt 1基因的3’RACE反应及RACE产物克隆 | 第62-63页 |
| ·Dmrt 1的序列分析 | 第63-66页 |
| ·Dmrt 1蛋白质二级结构预测 | 第66页 |
| ·Dmrt 1蛋白的B细胞表面可能性预测结果 | 第66-67页 |
| ·Dmrt 1基因的表达 | 第67-68页 |
| ·Dmrt 2基因的表达 | 第68页 |
| 4 讨论 | 第68-72页 |
| ·Dmrt基因家族及其保守性 | 第68-69页 |
| ·Dmrt1蛋白质二级结构 | 第69-70页 |
| ·Dmrt1和Dmrt2基因的表达与性别的分化发育 | 第70-72页 |
| 第三章 尼罗罗非鱼Sox基因保守区的克隆和Sox3表达分析 | 第72-86页 |
| 1 前言 | 第72页 |
| 2 材料与方法 | 第72-75页 |
| ·实验材料 | 第72页 |
| ·试剂 | 第72页 |
| ·引物 | 第72-73页 |
| ·基因组DNA提取 | 第73页 |
| ·RNA提取 | 第73页 |
| ·HMG-boxPCR扩增 | 第73-74页 |
| ·PCR产物的克隆 | 第74页 |
| ·SSCP分析 | 第74页 |
| ·Sox基因测序和分析 | 第74页 |
| ·RT-PCR | 第74-75页 |
| 3 结果与分析 | 第75-83页 |
| ·Sox基因HMG-box的扩增 | 第75-76页 |
| ·克隆的结果 | 第76页 |
| ·SSCP分析 | 第76页 |
| ·Sox基因序列分析 | 第76-78页 |
| ·不同物种Sox基因的同源性分析 | 第78-80页 |
| ·RNA提取结果 | 第80-81页 |
| ·Sox3不同组织RT-PCR扩增结果 | 第81页 |
| ·Sox3 HMG-box二级结构预测 | 第81页 |
| ·Sox3 HMG-box的B细胞表面可能性预测结果 | 第81-83页 |
| 4 讨论 | 第83-86页 |
| ·SRY基因 | 第83-84页 |
| ·Sox基因的内含子 | 第84页 |
| ·Sox基因中HMG基序的DNA结合特性 | 第84页 |
| ·Sox3基因 | 第84-86页 |
| 第四章 用用RAPD鉴定尼罗罗非鱼雌雄差异和遗传多态性 | 第86-100页 |
| 1 前言 | 第86页 |
| 2 材料与方法 | 第86-90页 |
| ·材料 | 第86-87页 |
| ·主要试剂 | 第87页 |
| ·研究方法 | 第87-89页 |
| ·基因组DNA的制备 | 第87-88页 |
| ·PCR反应 | 第88-89页 |
| ·琼脂糖电泳 | 第89页 |
| ·数据处理 | 第89-90页 |
| ·结果记录 | 第89页 |
| ·多态位点百分率 | 第89页 |
| ·个体间遗传相似系数 | 第89页 |
| ·群体遗传多态度 | 第89-90页 |
| 3 结果 | 第90-95页 |
| ·尼罗罗非鱼RAPD扩增及其标记 | 第90页 |
| ·尼罗罗非鱼个体水平DNA多态性 | 第90-95页 |
| ·雌、雄群体遗传多样性 | 第95页 |
| 4 讨论 | 第95-100页 |
| ·雄性标记的筛选 | 第95-96页 |
| ·尼罗罗非鱼群体遗传多样性 | 第96页 |
| ·RAPD技术的可靠性 | 第96-100页 |
| 第五章 尼罗罗非鱼AFLP技术体系的优化 | 第100-108页 |
| 1 前言 | 第100页 |
| 2 材料和方法 | 第100-104页 |
| · | 第100页 |
| ·材料 | 第100页 |
| ·主要试剂 | 第100页 |
| ·基因组DNA的制备 | 第100页 |
| ·AFLP体系 | 第100-104页 |
| ·酶切与连接 | 第100-101页 |
| ·单酶切与连接 | 第100-101页 |
| ·双酶切与连接 | 第101页 |
| ·酶切片段的扩增 | 第101-103页 |
| ·单酶水解片段的扩增 | 第101-102页 |
| ·双酶水解片段的扩增 | 第102-103页 |
| ·扩增产物的凝胶分析 | 第103页 |
| ·琼脂糖凝胶分析 | 第103页 |
| ·小面积凝胶分析 | 第103页 |
| ·测序凝胶电泳分析 | 第103页 |
| ·染色 | 第103-104页 |
| 3 结果 | 第104-106页 |
| ·酶切 | 第104页 |
| ·琼脂糖凝胶分析 | 第104-105页 |
| ·小面积凝胶分析 | 第105页 |
| ·测序凝胶电泳分析 | 第105页 |
| ·银染 | 第105-106页 |
| 4 讨论 | 第106-108页 |
| 第六章 用AFLP和SCAR分子标记对尼罗罗非鱼性别鉴定 | 第108-126页 |
| 1 前言 | 第108页 |
| 2 材料与方法 | 第108-113页 |
| ·材料 | 第108-109页 |
| ·DNA的提取 | 第109页 |
| ·AFLP实验程序 | 第109-111页 |
| ·酶切 | 第109页 |
| ·连接反应 | 第109-110页 |
| ·预扩增 | 第110页 |
| ·选择性扩增 | 第110-111页 |
| ·变性的聚丙烯酰胺凝胶电泳及银染 | 第111页 |
| ·从PAGE胶中回收DNA片段 | 第111页 |
| ·第2轮PCR扩增 | 第111-112页 |
| ·差异带的回收,及测序 | 第112页 |
| ·SCAR引物的设计 | 第112-113页 |
| ·SCAR-PCR反应 | 第113页 |
| ·DNA克隆与测序 | 第113页 |
| 3 结果 | 第113-123页 |
| ·适用AFLP分析的DNA模板的制备 | 第113页 |
| ·酶切 | 第113-114页 |
| ·模板DNA片段与接头的连接 | 第114页 |
| ·预扩增反应 | 第114-115页 |
| ·选择性扩增 | 第115-120页 |
| ·特异带的回收 | 第120-121页 |
| ·T1序列分析 | 第121-122页 |
| ·SCAR引物的设计 | 第122页 |
| ·PCR特异扩增 | 第122-123页 |
| ·T1标记的验证 | 第123页 |
| 4 讨论 | 第123-125页 |
| ·影响AFLP分析的因素 | 第123页 |
| ·尼罗罗非鱼雌雄差异 | 第123-124页 |
| ·SCAR标记的转换 | 第124页 |
| ·尼罗罗非鱼性别的影响因数 | 第124-125页 |
| ·鱼类性别分子鉴定 | 第125页 |
| 5 小结 | 第125-126页 |
| 参考文献 | 第126-142页 |
| 英文缩略词表 | 第142-144页 |
| 致谢 | 第144页 |
